1　材料

2　方法

3　结果

3.4　对去卵巢大鼠子宫组织病理变化的影响

给药12周取材时，显示模型组、雌激素组、二仙汤组大鼠双侧卵巢缺如。与假手术组比较，模型组大鼠子宫质量显著下降(P<0.01)；子宫HE染色结果表明，假手术组子宫管径较粗，内膜较厚，子宫内膜单层柱状上皮排列整齐；模型组子宫管腔狭窄，管壁明显变薄，黏膜层腺体减少，固有层呈萎缩组织象，血管稀少，内膜上皮细胞萎缩为扁平细胞；与模型组比较，雌激素组大鼠子宫质量显著增加(P<0.01)，子宫内膜上细胞增生，子宫内径扩大，子宫内膜被覆单层立方上皮，单层柱状上皮排列不规则，内膜腺体数目多，偶见分泌现象，间质致密；二仙汤组大鼠子宫质量虽无统计学差异，但仍增加，子宫内膜被覆单层扁平上皮或单层立方上皮，内膜腺体数目少，偶见分泌现象，间质致密。以上结果表明去卵巢大鼠模型复制成功；二仙汤对去卵巢大鼠子宫增重、子宫形态的改善具有一定作用，但效果不如雌激素。见表6，图1。

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二仙汤对去卵巢大鼠子宫组织病理变化的影响(HE，×50)

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二仙汤对去卵巢大鼠子宫质量的影响($\overline{x}$±s，n＝8)

组别	剂量/g·kg-1	子宫质量/g
假手术	-	0.547±0.073
模型	-	0.086±0.0282)
雌激素	1.8×10-4	0.192±0.0514)
二仙汤	7.5	0.123±0.030

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3.6　对去卵巢大鼠左室心肌组织病理变化的影响

从心肌HE染色、透射电镜、心肌TUNEL染色可看出，假手术组大鼠心肌横纹排列规则、清晰，心肌细胞排列整齐、质密，心肌细胞肌丝整齐，肌节规则、清晰，线粒体呈圆形或椭圆形，线粒体膜完整，线粒体嵴清晰无肿胀，心肌组织存在局灶性细胞凋亡；与假手术组比较，模型组大鼠心肌横纹局灶性溶解，心肌细胞局灶性萎缩、间质增生，可见细胞核固缩，心肌纤维断裂，部分肌丝局灶性溶解，线粒体嵴稀疏、肿胀，心肌组织中凋亡细胞较多，凋亡指数显著升高(P<0.01)；与模型组比较，雌激素组大鼠心肌横纹明显，心肌细胞偶有萎缩，局灶性间质增生，心肌细胞肌丝排列整齐，线粒体膜完整，线粒体嵴较清晰、无明显肿胀，心肌组织凋亡细胞减少，凋亡指数下降(P<0.05)；二仙汤组大鼠心肌横纹明显，心肌细胞的萎缩、间质增生情况较轻，心肌肌丝较模型组整齐，线粒体膜完整，线粒体嵴结构较模型组清晰，心肌组织凋亡细胞较少，凋亡指数显著下降(P<0.01)。见图2，图3，图4，表8。

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二仙汤对去卵巢大鼠左室心肌组织病理变化的影响(HE，×400)

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二仙汤对去卵巢大鼠左室心肌超微结构的影响(电镜，×25 000)

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二仙汤对去卵巢大鼠左室心肌细胞凋亡的影响(TUNEL，×200)

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二仙汤对去卵巢大鼠左室心肌细胞凋亡指数的影响($\overline{x}$±s，n＝8)

组别	剂量/g·kg-1	凋亡指数/%
假手术	-	10.46±2.51
模型	-	24.46±3.832)
雌激素	1.8×10-4	17.51±6.463)
二仙汤	7.5	14.20±4.504)

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4　讨论

循证医学表明，CVD的发病规律、临床表现、病理生理、治疗及预后存在性别差异^[20-21]：绝经前女性发病率较低，危险性约为男性的1/2^[22-23]；绝经后发病率上升为绝经前2～6倍^[1]，这已得到临床医生的关注。目前，女性在更年期后出现的心功能异常这一现象，已成为临床和基础研究的热点。有研究结果表明，更年期女性的心脏结构及功能出现不利变化^[11-13]。与绝经前女性比较，绝经后女性心肌收缩功能下降，顺应性降低，舒张功能减退。还有研究表明绝经后女性出现每次心搏量、每分钟心输出量、心脏指数以及EF等指标下降的心肌收缩功能异常的表现。但关于更年期心功能演变的基础研究少见。

中医理论认为肾气虚衰引起诸脏乃至全身机能失调是更年期综合征发病的根本原因^[7]。相较于HRT的风险^[4-5]，补肾法能够调和更年期各脏腑、气血、阴阳失调症状，从本质上治疗女性更年期疾病。其中补肾方剂二仙汤以仙茅、淫羊藿为君，巴戟天为臣，佐以知母、黄柏，以当归为使药，以补肾阳为主，兼顾调肾阴，全方壮阳与滋阴并举，补而不燥，可以整体调节下丘脑-垂体-卵巢轴稳态，对更年期症状具有较好的调节作用，广泛应用于女性更年期综合征的治疗中^[7-8]。

在本次实验中，大鼠子宫病理、子宫质量以及给药不同阶段的血清E₂结果表明，大鼠因卵巢切除而出现E₂进行性减少、子宫萎缩、子宫质量下降；二仙汤具有雌激素样的作用，但上述结果不如雌激素明显。这与陶仕英等^[24]的研究结果一致。大鼠子宫雌激素受体丰富，二仙汤可通过激素作用的靶器官-子宫，直接发挥雌激素受体调节剂的作用，增加血清E₂含量，但对大鼠子宫内膜组织无明显促增殖作用^[6，24]。

心功能检测结果表明，给药4周去卵巢大鼠EF下降，LVVols增大，FS以及LVIDs，LVIDd和LVVold也有较明显的变化，但差异无统计学意义；雌激素对去卵巢大鼠下降的EF%具有较好的改善作用，这可能是增加的LVPWs和心腔容积的变化率的结果^[25]；二仙汤也增加了去卵巢大鼠的EF，但效果不如雌激素；此外，二仙汤对去卵巢大鼠LVVols，LVVold的异常变化也有一定的改善作用。去卵巢大鼠这一阶段心肌收缩功能的异常可能与E₂含量的骤减有关，短期内E₂的缺乏可能造成了去卵巢大鼠的创伤应激，这将影响心肌细胞内钙稳态，从而造成心肌的收缩功能的下降^[11，26]。给药8周去卵巢大鼠心肌舒张功能有所下降，但组间差异尚未达到统计学意义，可能原因是此时去卵巢大鼠的心功能处于代偿期。给药12周去卵巢大鼠LVIDs，LVVols，LVIDd，LVVold均显著增大，而EF未见明显异常。此阶段去卵巢大鼠由于E₂长期缺乏，影响心肌血管扩张导致心肌细胞缺血缺氧^[15]，为维持正常血液灌流，心肌出现射血时间延长、心室舒张时间缩短的代偿改变，这进一步减少了心室舒张期血液灌注，从而产生恶性循环并引起左室内径增加，心肌出现舒张功能障碍^[27]。笔者推测此时去卵巢大鼠收缩期、舒张期指标的同步改变达到了平衡，从而使EF维持在正常水平；此时雌激素的作用效果不佳，而二仙汤对去卵巢大鼠心功能的作用效果远优于雌激素。这提示改善去卵巢大鼠的心功能并非只有增加血清E₂这一途径。中药具有多组分、多靶点的作用特征，二仙汤可能通过多途径改善了去卵巢大鼠的心功能，这值得进一步的实验研究。

绝经后女性高血压发病率较前增加，ET-1和AngⅡ合成增加引起的缩血管效应是重要机制之一^[27]。炎症在高血压的发生发展中扮演重要角色，AngⅡ级联驱动的炎性信号传导被认为导致了年龄相关的不利的动脉结构和功能重塑，AngⅡ可强力收缩小动脉、刺激醛固酮分泌而扩容，通常表现为SBP的升高^[28-30]。研究表明，卵巢切除可加重AngⅡ造成的小鼠血压升高、心室重构，而补充雌激素则抑制了AngⅡ对去卵巢小鼠的升压作用^[16]。在本次实验中，给药4周时去卵巢大鼠已出现SBP升高的现象，随着周龄的增加去卵巢大鼠的SBP不断升高，给药12周时去卵巢大鼠血清中ET-1，AngⅡ含量显著增加，其产生的缩血管效应可能是SBP升高的原因；雌激素和二仙汤都表现出降低SBP的作用，此两组大鼠血清中ET-1，AngⅡ含量均减少，且二仙汤的降压效果优于雌激素。中医理论认为女性更年期高血压的根本病机在于肾虚引起的诸脏阴阳失调，风、痰、瘀、虚等病理因素夹杂其间。二仙汤立意“调和阴阳”，方中巴戟天可化痰，当归可补血治疗血虚眩晕，淫羊藿可降压，诸补阳药物温肾助阳、降脂化浊，治疗更年期高血压往往获效^[6，17]。

心脏维持正常生理功能和收缩功能所需的能量90%以上由线粒体提供，线粒体形态、内容物、代谢的稳定状态，对心肌细胞能量的正常供应至关重要。线粒体结构、功能的异常将导致心脏“老化”^[31-33]。线粒体途径激活后，细胞色素C被释放到心肌细胞胞浆中，参与诱导心肌细胞凋亡，由此导致心功能下降、左室重构^[29，34-35]。研究表明，去卵巢动物模型心肌细胞的凋亡一部分由心肌线粒体途径引起^[36]。随着E₂缺乏时间的延长，线粒体功能出现进行性障碍^[37]。本次实验结果表明，去卵巢大鼠心肌横纹部分溶解、心肌纤维断裂，心肌间隙增大，线粒体嵴结构出现异常，凋亡心肌细胞增多；雌激素和二仙汤都在一定程度上改善去卵巢大鼠心肌结构、减少心肌细胞凋亡。现代药理研究表明，巴戟天具有改善大鼠心肌细胞凋亡的作用^[17]，一定程度解释了本实验中二仙汤的作用效果。

综上，在本次实验中，去卵巢大鼠在给药4周出现心脏收缩功能异常，给药8周心功能处于代偿状态，给药12周心脏收缩、舒张功能均出现异常。大鼠去卵巢后心血管出现心功能降低、血压增高等一系列病理改变，与心功能下降比较血压的病理变化出现更早，且收缩压、舒张压以及脉压差随时间增加呈逐渐升高趋势。补肾方剂二仙汤通过调节E₂，血液活性物质ET-1，AngⅡ及心肌凋亡等途径发挥对去卵巢大鼠心血管的保护作用，进一步的机制值得深入研究。目前研究较多关注了二仙汤及其加减方用于治疗更年期高血压、更年期综合征等疾病的作用^[17，38]，本次实验通过不同阶段大鼠心功能的检测，表明二仙汤还可用于更年期心功能异常的治疗，具有一定临床意义。