miR-3175/SIX5轴调节神经胶质瘤细胞的增殖和迁移
论著
miR-3175/SIX5轴调节神经胶质瘤细胞的增殖和迁移
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［目的］
探讨miR-3175在胶质瘤细胞中的表达，以及对胶质瘤细胞增殖和迁移能力的影响及相关作用机制。
［方法］
采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time quantitative polymerase chain reaction，Real-time qPCR）检测胶质瘤细胞与人正常胶质细胞中miR-3175的表达水平。向胶质瘤细胞株中转染miR-3175 mimics和inhibitors后，采用噻唑蓝（3-（4，5-Dimethylthiazol-2-yl）-2，5-diphenyltetrazolium bromide，MTT）法检测各组胶质瘤细胞增殖能力的变化，以Transwell实验对细胞迁移能力进行评估，流式细胞术检测细胞凋亡。使用miRTarBase和TargetScan预测软件对miR-3175的作用靶点进行预测，以双荧光素酶报告基因系统、免疫印迹法和Real-time qPCR分析miR-3175和sineoculis同源异型盒同源物5（sineoculis homeobox homologue 5，SIX5）的相互作用。通过生物信息学与免疫印迹法分析SIX5在胶质瘤中的表达；将pCDNA3.4-SIX5、pCDNA3.4-SIX5+miR-3175 mimics和miR-3175 mimics分别转染到胶质瘤细胞，以MTT法、Transwell实验和流式细胞术检测miR-3175及其靶基因SIX5对胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响。
［结果］
Real-time qPCR结果表明，胶质瘤细胞中miR-3175基因表达水平明显低于人正常胶质细胞组，呈低表达（P<0.01）；细胞体外转染实验表明，上调miR-3175能够显著抑制胶质瘤细胞的增殖和迁移能力（P<0.05），能够通过将胶质瘤细胞的细胞周期阻滞于G0/G1期，诱导其凋亡（P<0.05，P<0.01）；生物信息学软件预测结果显示SIX5可能是miR-3175的潜在靶基因，免疫印迹法、荧光素酶报告基因和Real-time qPCR结果进一步证明SIX5与miR-3175的表达呈负相关（P<0.01）。细胞体外转染实验结果发现，转染pCDNA3.4-SIX5后，胶质瘤细胞的增殖和迁移能力增加（P<0.05，P<0.01），凋亡率下降（P<0.05，P<0.01），而且可以削弱miR-3175对胶质瘤恶性生物学行为的抑制作用。
［结论］
miR-3175在胶质瘤细胞中显著低表达，并抑制胶质瘤的恶性生物学行为，可能的机制是抑制促癌基因SIX5的表达，从而降低胶质瘤的增殖和迁移能力，提示其具有成为胶质瘤诊疗新靶点的潜力。
miR-3175胶质瘤细胞增殖细胞凋亡细胞周期sineoculis同源异型盒同源物5增殖迁移
