半枝莲乙醇提取物对高低转移性肝细胞癌细胞生长和侵袭的影响
实验研究
半枝莲乙醇提取物对高低转移性肝细胞癌细胞生长和侵袭的影响
197007
目的：
研究半枝莲乙醇提取物对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）细胞生长、迁移和侵袭的影响及其机制。
方法：
实验选用高、低转移性HCC细胞系MHCC-97H和MHCC-97L，采用不同浓度（0.25 g·L-1、0.5 g·L-1、1.0 g·L-1、2.0 g·L-1和3.0 g·L-1）的半枝莲乙醇提取物进行干预，筛选出50%最大抑制浓度（half maximal inhibitory concentration，IC50）作为后续实验浓度，CCK-8实验和平板克隆实验测定细胞增殖情况；流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡及EpCAM+和CD133+细胞比例；细胞划痕实验评估细胞迁移率；Transwell小室迁移和侵袭实验评估细胞迁移抑制率和侵袭抑制率；细胞成球实验测定肿瘤细胞的干细胞特性；Western Blot检测CyclinD1、P27、Bcl-2、Vimentin、Ki-67、Bax、E-cadherin蛋白表达水平。将16只SPF级4周龄雄性BALB/c裸鼠分为半枝莲乙醇提取物组（0.97 g·kg-1）和对照组，每组8只，于裸鼠左侧腋窝皮下注射100 μL（2×106个）MHCC-97H细胞，待移植瘤直径>0.5 cm开始给药治疗，对照组给予0.9%生理盐水灌胃，隔5天评估移植瘤体积变化；给药35 d后HE染色检测移植瘤的形态变化及移植瘤肝、肺转移情况；免疫组织化学染色检测Ki-67蛋白表达水平。
结果：
2.0 g·L-1为半枝莲乙醇提取物的最佳干预浓度。与对照组比较，半枝莲乙醇提取物可明显抑制MHCC-97H和MHCC-97L细胞增殖，明显减少MHCC-97H和MHCC-97L细胞克隆数目，G0/G1期细胞比例显著增加，S期和G2/M期细胞比例显著减少，细胞凋亡率显著升高，细胞划痕愈合进程明显减缓、细胞迁移和侵袭数目明显减少，细胞成球体积明显变小，细胞成球数目、球体形成率及EpCAM+与CD133+细胞比例明显降低，Cyclin D1、Bcl-2、Ki-67、Vimentin蛋白表达水平明显降低，P27、Bax、E-cadherin蛋白表达水平明显升高，差异均具有统计学意义（P<0.05）。与对照组比较，半枝莲乙醇提取物组裸鼠MHCC-97H细胞移植瘤体积明显缩小，瘤质量及Ki-67蛋白表达水平明显降低；肝、肺组织形态学检查显示，半枝莲乙醇提取物组大鼠的癌转移灶大小和数目明显降低，差异均具有统计学意义（P<0.05）。移植瘤组织形态学检查显示，对照组肿瘤细胞呈弥散致密排列、有不同程度有丝分裂活性；半枝莲乙醇提取物组肿瘤组织可见明显的细胞坏死和凋亡。
结论：
半枝莲乙醇提取物可通过抑制细胞增殖、阻滞细胞周期进程、促进肝癌细胞凋亡、调控上皮间质转化和干细胞特性相关基因表达抑制肝癌细胞生长和侵袭。
半枝莲乙醇提取物肝细胞癌上皮间质转化干细胞特性细胞凋亡细胞侵袭裸鼠
