近年来，随着我国社会经济的发展，高血压的患病率在逐年上升[1]，且呈低龄化趋势。虽然现代研究在高血压的诊疗方面取得了很多突破，但高血压靶器官损伤导致的心、脑、肾等器官的损伤仍极大地危害着人类健康[2]。心肌纤维化与高血压的预后及其靶器官损伤关系密切[3]。机体血压升高会损伤血管内皮，引起免疫系统激活，心肌组织炎症细胞浸润，从而产生肿瘤坏死因子-α(TNF-α)，白细胞介素-4(IL-4)和IL-6等多种炎性因子，成纤维细胞被激活，刺激心脏胶原纤维的合成增多，进而导致心肌纤维化[4-5]。目前，降压、抗炎等多种抗纤维化的策略在改善高血压靶器官损伤中已经取得了良好的效果[4]。此外，转化生长因子-β1(TGF-β1)可通过旁分泌和自分泌两种途径发挥作用，诱导成纤维细胞转化为肌成纤维细胞，促进α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达与胶原纤维的合成，同时，Smads是TGF-β1信号通路下游的关键调节因子，可以将TGF-β1信号从细胞膜直接转导至细胞核内[6]。TGF-β1通过Smad2，Smad3信号途径促进成纤维细胞转化为肌成纤维细胞，以及细胞外基质的沉积，最终导致心肌纤维化[7]。
桂枝汤源自《伤寒论》，由桂枝、白芍、炙甘草、生姜、大枣组成，具有滋阴和阳，调和营卫的作用[8-9]，根据《难经·十四难》云：“损其心者，调其营卫”，本课题组创新性地运用桂枝汤加减组方治疗心系疾病，并取得了良好的疗效，既往临床报道也证明桂枝汤加减方能够有效改善机体血压[10]，动物实验证明了桂枝汤在自发性糖尿病心肌病大鼠中具有改善心肌纤维化程度，抑制多种炎症因子的作用[11-12]。本研究旨在深层次探讨桂枝汤不同桂芍比例配伍能否通过调节TGF-β1/Smads通路及减轻炎症反应改善盐敏感高血压大鼠的心肌纤维化。
1 材料
1.1 动物
6周龄雄性盐敏感高血压大鼠40只，SPF级，体质量(160±20) g，购自北京维通利华有限公司，实验动物质量合格证号SCXK(京)2016-0006。实验在山东中医药大学实验动物中心SPF实验室进行，室内温度20～22 ℃，相对湿度60%～65%。本实验过程遵循动物伦理相关规定，在山东中医药大学动物伦理委员会监督下进行实验(伦理批号SDVTCM2018071501)。
1.2 药物
桂枝汤方药物组成为桂枝、白芍、炙甘草、生姜、大枣，取原料药材，加入10倍量水后，回流提取2次，第1次水煎煮1.5 h，第2次水煎煮1 h，合并提取液，过滤，减压浓缩至相对密度为1.20～1.25 (70～80) ℃，加入糖粉和糊精制颗粒，于60 ℃以下风干，制成2 g生药/1 g颗粒剂。使用时配置生药质量浓度为1 g·mL-1水溶液。上述药材购于山东省中医院，经山东中医药大学药学院的李峰教授鉴定合格。
1.3 试剂
PCR引物由大连宝生物工程有限公司(Takara)设计合成；兔抗大鼠TGF-β1单克隆抗体、兔抗大鼠Smad2多克隆抗体、兔抗大鼠Smad3单克隆抗体、兔抗大鼠Smad7多克隆抗体、兔抗大鼠α-SMA多克隆抗体(英国Abcam公司，批号分别为ab179695，ab63576，ab40854，ab216428，ab5694)；兔β-肌动蛋白(β-actin)单克隆抗体，trizol试剂(德国Proteintech Group公司，批号分别为20536-1-AP，20547-2-AP)；辣根酶标记山羊抗兔免疫球蛋白(Ig)G(北京中杉金桥生物技术有限公司，批号ZB-2301)；苏木素染液套装(武汉谷歌生物科技有限公司，批号G1005)；免疫组化检测试剂盒，马松(Masson)染液套装(武汉赛维尔生物科技有限公司，批号分别为G1210，G1006)。
1.4 仪器
IITC型多通道无创血压计(美国IITC INC/Life Science公司)；Light Cycler 480 Ⅱ型实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)仪(美国Roche集团)；Mini-Protean Tetra型电泳系统(美国Thermo Scientific公司)；Trans-Blot Turbo型转膜仪(美国Bio-Rad公司)；Fluor Chem Q型成像分析系统(美国Alpha Innotech公司)；Nikon Eclipse E100型正置光学显微镜，Nikon DS-U3型成像系统(日本尼康公司)；M5Vet型超声仪(迈瑞生物医疗电子股份有限公司)。
2 方法
2.1 动物分组、给药与模型的建立
参考盐敏感高血压大鼠的造模方法[13]，大鼠适应性饲养1周后(0.3%NaCl饲料)，将40只大鼠随机分为正常组、模型组、桂枝汤桂枝-白芍(桂芍)1∶1组、桂芍1∶2组、桂芍2∶1组，每组8只。正常组每天给予0.3%NaCl饲料，模型组与桂枝汤各组每天给予8%NaCl饲料，以诱导建立高血压病模型。第11周开始，根据成人用药剂量[14]，按照大鼠-成人剂量的换算公式，并结合既往研究基础计算大鼠的用药量[15]，正常组和模型组每天分别给予等体积的生理盐水灌胃，桂枝汤桂芍1∶1组，1∶2组和2∶1组大鼠每天分别按4.0，5.5，5.5 g·kg-1灌胃，每日灌喂1次，连续灌胃4周。
2.2 样本收取
在15周后，所有大鼠禁食12 h，称体质量并记录，腹腔注射盐酸戊巴比妥钠(40 mg·kg-1)麻醉大鼠，后钝性分离腹主动脉，用一次性采血针采取血液6～8 mL，置于离心管中，于3 000 r·min-1离心机中离心15 min，吸取血清，-80 ℃冰箱保存。采血后，处死大鼠，迅速开胸立即取出心脏，在冰上操作，剪取右心房和左心室，用4 ℃生理盐水冲洗干净，纱布拭干，左心室分两部分分装，分别多聚甲醛固定，用于苏木素-伊红(HE)，Masson染色，免疫组化法检测，以及-80 ℃冰箱保存，用于蛋白免疫印迹法(Western blot)，Real-time PCR检测。
2.3 血压测量
使用IITC-229NIBP系统和计算机软件IITC-31相连的尾套测量大鼠血压，分别在药物干预前及药物干预后每周测量大鼠尾动脉收缩压。每只大鼠在安静状态下进行重复测量5次，每次间隔5 min，取平均值记录后即为大鼠血压值。
2.4 心功能检测
大鼠经腹腔注射盐酸戊巴比妥钠(40 mg·kg-1)麻醉后，左前胸部进行脱毛，取仰卧位，在二维超声引导下，用超声仪分别测定左室收缩末内径(LVESD)，左室舒张末期内径(LVEDD)，左室射血分数(LVEF)，左室短轴缩短分数(LVFS)。每次测量3个连续的心动周期后取平均值，即为结果。
2.5 HE染色观察各组大鼠心肌组织形态改变
取大鼠心脏组织置入多聚甲醛中固定，脱水后石蜡包埋，制作厚度为4 μm的切片，然后经二甲苯脱蜡和梯度乙醇复水，苏木素染色5 min，盐酸乙醇分化，氨水返蓝，蒸馏水清洗，梯度乙醇脱水，伊红染色5 min，进行75%盐酸乙醇脱水，二甲苯透明，最后中性树胶封片。于倒置光学显微镜下观察大鼠心脏组织形态变化，并在不同视野下随机取图。
2.6 Masson染色观察各组大鼠胶原纤维的改变
将石蜡切片常规脱蜡，入重铬酸钾浸泡过夜，蒸馏水冲洗，铁苏木素染液染色3 min，蒸馏水冲洗，分化液分化，蒸馏水冲洗，返蓝液返蓝，蒸馏水冲洗，丽春红酸性品红浸染5～10 min，蒸馏水冲洗，磷钼酸浸染1～3 min，入苯胺蓝染液染3～6 min，用1%冰醋酸分化，乙醇上行梯度脱水处理，二甲苯透明，中性树胶封片。采用Image J对视野内的心肌胶原总面积进行分析，计算CVF，随机选取5个视野，取其均值。计算总胶原容积分数(CVF)，CVF＝视野内心肌胶原面积/全视野面积×100%。
2.7 免疫组化检测Ⅰ，Ⅲ型胶原的含量
将石蜡切片常规脱蜡，高温高压抗原修复10 min，3%过氧化氢溶液孵育25 min，于磷酸盐缓冲液(PBS)中洗涤3次，每次3 min，加3%BSA均匀覆盖组织，室温封闭30 min，4 ℃ Col Ⅰ一抗(1∶100)，Col Ⅲ一抗(1∶100)孵育过夜，次日用PBS洗涤，滴加二抗(1∶200)后37 ℃孵育2 h后，PBS洗涤，滴加DAB进行显色2 min，苏木素复染3 min，在梯度乙醇中脱水，每次2 min，二甲苯中浸泡5 min透明，树胶封片。置于显微镜下观察并拍照，应用Image J软件分析，随机选取5个视野，计算阳性表达面积占整个视野百分比，取其均值。
2.8 Real-time PCR测定心肌组织IL-10，IL-6，TNF-α mRNA的表达
使用trizol试剂提取大鼠心肌组织总RNA后，逆转录成cDNA，再加入相应的引物，扩增大鼠心肌组织中的IL-10，IL-6，TNF-α mRNA。反应体系为10 μL，包括SYBR Premix Ex Taq 5 μL，上、下游引物各0.4 μL，cDNA模板1 μL，灭菌水3.2 μL。反应条件为94 ℃预变性2 min，94 ℃变性20 s，58 ℃退火20 s，72 ℃延伸20 s，扩增40循环。采用2-ΔΔCt方法分析mRNA的表达水平。引物序列见表1。
| 引物 | 上游序列(5′-3′) | 下游序列(5′-3′) | 长度/bp |
|---|---|---|---|
| TNF-α | TTCCAATGGGCTTTCGGAAC | AGACATCTTCAGCAGCCTTGTGAG | 118 |
| IL-6 | ATTGTATGAACAGCGATGATGCAC | CCAGGTAGAAACGGAACTCCAGA | 150 |
| IL-10 | CAGACCCACATGCTCCGAGA | CAAGGCTTGGCAACCCAAGTA | 141 |
| β-actin | GGAGATTACTGCCCTGGCTCCTA | GACTCATCGTACTCCTGCTTGCTG | 150 |
2.9 蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心脏组织TGF-β1，Smad2，Smad3，α-SMA，Smad7蛋白表达
动物实验中称取大鼠心肌组织30 mg，置于离心管中，加入RIPA裂解缓冲液300 μL以及PMSF 3 μL，提取各组盐敏感大鼠心肌组织总蛋白，BCA法测定总蛋白浓度，计算上样量，按照试剂盒说明配置分离胶与浓缩胶，电泳结束后，转印至PVDF膜上，5%脱脂奶粉室温封闭1 h，经PBS洗涤后加入TGF-β1(1∶1 000)，Smad2(1∶1 000)，Smad3(1∶2 000)，Smad7(1∶800)，α-SMA(1∶1 000)相应的一抗溶液中，于4 ℃孵育过夜，取出后用TBST洗涤，加入相应二抗(1∶1万)，摇床孵育1 h，TBST洗涤，化学发光法进行曝光拍照保存，采用Image J软件对条带的灰度值进行分析。
2.10 统计学方法
所有数据均采用SPSS 17.0软件进行统计学处理，计量资料以
3 结果
3.1 对盐敏感大鼠收缩压水平的影响
实验期间，与正常组比较，自第8周起模型组收缩压出现持续升高(P<0.01)。与模型组比较，从第12周到15周桂枝汤各组收缩压显著上升(P<0.01)；其中，桂芍1∶1组收缩压低于桂芍2∶1组(P<0.01)。见表2。
| 组别 | 剂量/g·kg-1 | 第7周 | 第8周 | 第9周 | 第10周 | 第11周 |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 正常 | - | 119.11±3.65 | 122.30±3.41 | 125.99±5.14 | 128.31±4.65 | 127.70±5.93 |
| 模型 | - | 127.67±3.18 | 140.88±4.541) | 153.69±6.301) | 167.44±5.811) | 182.47±8.801) |
| 桂芍1∶1 | 4.0 | 129.33±4.15 | 141.40±3.57 | 155.21±5.62 | 169.70±6.35 | 183.82±7.55 |
| 桂芍1∶2 | 5.5 | 129.28±3.81 | 140.44±3.86 | 155.55±6.54 | 170.22±6.70 | 184.25±6.50 |
| 桂芍2∶1 | 5.5 | 130.50±4.20 | 148.12±3.65 | 160.21±5.42 | 174.18±5.91 | 188.27±4.25 |
3.2 对盐敏感大鼠心脏超声的影响
与正常相比较，模型组大鼠LVESD，LVEDD水平显著升高(P<0.01)，LVFS，LVEF水平显著降低(P<0.01)。与模型组比较，桂枝汤各组LVESD，LVEDD水平显著降低(P<0.01)，LVFS，LVEF水平显著升高(P<0.01)，其中桂芍1∶1组与桂芍1∶2，2∶1组比较，LVESD，LVEDD水平降低显著，LVFS水平显著升高(P<0.01)。见表3。
| 组别 | 剂量/g·kg-1 | LVEDD/mm | LVESD/mm | LVFS/% | LVEF/% |
|---|---|---|---|---|---|
| 正常 | - | 4.86±0.15 | 2.68±0.21 | 45.22±1.60 | 80.10±2.09 |
| 模型 | - | 6.13±0.211) | 4.21±0.141) | 30.80±2.421) | 69.80±1.911) |
| 桂芍1∶1 | 4.0 | 5.11±0.193，4，5) | 3.08±0.173，4，5) | 39.14±1.303，4，5) | 76.70±1.303) |
| 桂芍1∶2 | 5.5 | 5.47±0.173，5) | 3.53±0.163，5) | 36.44±1.283，5) | 75.32±1.263) |
| 桂芍2∶1 | 5.5 | 5.71±0.293) | 3.85±0.303) | 30.52±2.203) | 75.64±1.493) |
3.3 对盐敏感大鼠心肌组织病理形态的影响
3.3.1 HE染色
正常组心肌纤维排列整齐，结构清晰，炎性细胞浸润较少。模型组大鼠心肌纤维排列紊乱，细胞间隙增宽且存在水肿，出现大量炎性细胞浸润。桂芍1∶1组心肌纤维排列较整齐，细胞排列较规整，炎性细胞浸润减少，心肌间质水肿不明显，较模型组有明显改善。桂芍1∶2组心肌纤维排列稍规整，偶有少量炎性细胞的浸润，心肌间质存在轻度的水肿，较模型组有一定改善。桂芍2∶1组心肌纤维化程度较模型组改善不明显。见图1。
3.3.2 Masson染色
正常组心肌细胞排列整齐，细胞间质稍有少量蓝色胶原纤维。模型组可见大量胶原蛋白沉积在细胞外基质以及血管的周围。与模型组比较，桂枝汤各组胶原沉积程度减轻。对含有胶原的区域分析显示，桂芍1∶1组胶原容积分数减轻效果优于1∶2组和2∶1组(P<0.01)。见图2，表4。
| 组别 | 剂量/g·kg-1 | 胶原容积分数/% |
|---|---|---|
| 正常 | - | 3.00±0.51 |
| 模型 | - | 11.02±0.721) |
| 桂芍1∶1 | 4.0 | 4.11±0.173，4，5) |
| 桂芍1∶2 | 5.5 | 5.05±0.253，5) |
| 桂芍2∶1 | 5.5 | 8.20±0.303) |
3.4 对盐敏感大鼠Ⅰ型胶原，Ⅲ型胶原表达的影响
正常组可见心肌细胞间质与血管周围有少量的棕黄色Ⅰ型，Ⅲ型胶原纤维。与正常组比较，模型组大鼠Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原阳性面积表达明显增加，Ⅰ/Ⅲ型胶原的值显著升高(P<0.01)。与模型组比较，桂枝汤各组Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原阳性面积表达减少，Ⅰ/Ⅲ型胶原的值显著降低(P<0.01)，其中桂芍1∶1组改善上述指标效果优于桂芍1∶2，2∶1组(P<0.01)。见图3，图4，表5。
| 组别 | 剂量/g·kg-1 | Ⅰ型胶原 | Ⅲ型胶原 | Ⅰ/Ⅲ型胶原 |
|---|---|---|---|---|
| 正常 | - | 4.10±0.15 | 4.18±0.21 | 1.03±0.10 |
| 模型 | - | 12.13±0.211) | 9.89±0.141) | 1.33±0.121) |
| 桂芍1∶1 | 4.0 | 6.15±0.193，4，5) | 4.95±0.173，4，5) | 1.25±0.153，5) |
| 桂芍1∶2 | 5.5 | 6.61±0.173，5) | 5.88±0.163，5) | 1.14±0.153) |
| 桂芍2∶1 | 5.5 | 7.38±0.293) | 6.73±0.303) | 1.125±0.183) |
3.5 对盐敏感大鼠心肌组织中TGF-β1，Smad2，Smad3，α-SMA，Smad7蛋白表达水平的影响
与正常组比较，模型组TGF-β1，Smad2，Smad3，α-SMA蛋白表达显著增高(P<0.01)，Smad7蛋白表达降低(P<0.01)。与模型组比较，桂枝汤各组TGF-β1，Smad2，Smad3，α-SMA蛋白表达明显降低(P<0.01，P<0.05)，Smad7蛋白表达显著增高(P<0.01)；与桂芍2∶1组比较，桂芍1∶1组TGF-β1，Smad2，Smad3，α-SMA蛋白表达降低(P<0.01)，Smad7蛋白表达增高(P<0.01)。见图5，表6。
| 组别 | 剂量/g·kg-1 | TGF-β1/β-actin | Smad2/β-actin | Smad3/β-actin | α-SMA/β-actin | Smad7/β-actin |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 正常 | - | 0.14±0.05 | 1.05±0.11 | 0.30±0.14 | 0.85±0.09 | 2.59±0.12 |
| 模型 | - | 0.30±0.041) | 2.30±0.141) | 0.75±0.131) | 2.54±0.151) | 1.03±0.211) |
| 桂芍1∶1 | 4.0 | 0.16±0.033，5) | 1.45±0.073，5) | 0.40±0.083，5) | 1.85±0.063，5) | 2.04±0.033，5) |
| 桂芍1∶2 | 5.5 | 0.20±0.013，5) | 1.63±0.043) | 0.55±0.012) | 1.98±0.013，5) | 1.58±0.083) |
| 桂芍2∶1 | 5.5 | 0.25±0.043) | 1.90±0.073) | 0.64±0.05 | 2.12±0.043) | 1.30±0.033) |
3.6 对盐敏感大鼠IL-6，TNF-α，IL-10 mRNA表达的影响
与正常组比较，模型组IL-6，TNF-α，IL-10 mRNA的表达显著增高(P<0.01)。与模型组比较，桂枝汤各组IL-6，TNF-α mRNA的表达降低(P<0.01)，桂芍1∶1组和1∶2组IL-10 mRNA的表达增高(P<0.01)，桂芍2∶1组IL-10 mRNA的表达明显增高(P<0.05)；其中桂芍1∶1组和1∶2组对IL-6，TNF-α mRNA表达的抑制作用及对IL-10 mRNA的表达的促进作用优于桂芍2∶1组(P<0.01)。见表7。
| 组别 | 剂量/g·kg-1 | IL-6 | TNF-α | IL-10 |
|---|---|---|---|---|
| 正常 | - | 1.02±0.15 | 0.91±0.21 | 1.13±0.20 |
| 模型 | - | 2.03±0.211) | 2.10±0.141) | 2.02±0.151) |
| 桂芍1∶1 | 4.0 | 1.53±0.113，5) | 1.15±0.173，5) | 2.73±0.183，4，5) |
| 桂芍1∶2 | 5.5 | 1.64±0.143，5) | 1.27±0.163) | 2.48±0.123，5) |
| 桂芍2∶1 | 5.5 | 1.82±0.133) | 1.44±0.203) | 2.17±0.132) |
4 讨论
高血压是临床常见疾病之一，是卒中，心血管疾病和肾脏疾病的主要危险因素，其中高血压所导致的心脏损伤是现代临床中最常见的致死原因。心肌纤维化是高血压心肌重构的主要病理特征，是控制高血压靶器官损伤的关键。有一些研究显示，TGF-β1/Smads信号通路与炎症反应在心肌纤维化的进展中发挥关键作用[16-17]。高血压引起的心肌纤维化与心力衰竭、心源性猝死等心血管事件的发生密切相关。因此深入探讨高血压引起心肌纤维化的具体机制以及制定先进的治疗策略，对防治高血压导致的靶器官损伤有重要的理论意义和价值。
本实验将雄性6周龄盐敏感高血压大鼠喂养至第15周，其中在第8周时观察到模型组与桂枝汤各组出现血压升高，说明本实验造模成功。本实验结果显示，模型组大鼠出现血压升高，心室收缩舒张功能降低，胶原分数升高。而通过灌胃治疗4周后，桂枝汤各组出现不同程度的血压上升延缓，心室收缩舒张功能改善，心肌的病理形态明显改善，这与Koibuchi等[13]的研究相一致。提示，桂枝汤对高血压引起的心肌纤维化有一定的改善作用。
机体血压升高，促进心肌成纤维细胞对TGF-β1的合成与分泌[18]，TGF-β1募集并磷酸化其下游因子Smad2，Smad3(受体调节型Smad蛋白，R-Smads)，与Smad4(通用型Smad蛋白，Co-Smads)蛋白形成Smads复合物，转移至细胞核内，上调与细胞外基质合成相关的基因表达，导致ECM的沉积，促进心肌纤维化[19]；Smad7(抑制型Smads蛋白，I-Smads)通过与Smad2，Smad3蛋白竞争性的结合TGF-β1受体，阻断Smad2，Smad3的激活，从而抑制心肌纤维化的发生发展[20]。心肌成纤维细胞的增殖与心肌胶原纤维的增加是心肌纤维化的重要指标，其中α-SMA作为成纤维细胞活化的主要标记物，可以用来衡量心肌纤维化的程度[21]。已有研究表明，TGF-β1能够在ECM和基底膜处促进胶原蛋白Ⅰ和Ⅲ的合成[22]，Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白是细胞外基质的主要成分，主要由心肌成纤维细胞分泌，具有支持与连接心肌细胞的作用，且Ⅰ/Ⅲ型比值也可用来衡量心肌纤维化程度。本实验显示，桂枝汤各组能够有效抑制盐敏感高血压大鼠心肌中的TGF-β1，Smad2，Smad3，α-SMA的蛋白表达，增加Smad7蛋白表达，降低Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白的比例，这与WANG等[23]的研究结果一致。由此推测，桂枝汤改善心肌纤维化的作用机制之一可能与TGF-β1/Smads信号转导通路有关。
近年来研究表明，炎症与高血压心肌纤维化的发生发展关系密切[24]。血压升高导致室壁压力负荷增加，RASS的激活与血流动力学的改变会诱发血管内皮的损伤，其通透性的增加会导致多种活化的炎性细胞(如单核巨噬细胞、中性粒细胞等)进入心肌组织中，释放炎症因子，进而激活炎症通路，促进心肌成纤维细胞转化为肌成纤维细胞及心肌胶原纤维的合成[25]。TNF-α是由激活的巨噬细胞或单核细胞所产生，能够通过促调节细胞外基质的合成及心肌细胞凋亡和坏死等多种途径导致心肌纤维化[26]。IL-6是由血管内皮细胞和平滑肌细胞所产生，可以促进心肌成纤维细胞的增殖和细胞外基质中胶原的合成[27]。IL-10是由单核巨噬细胞所分泌的一种抗炎细胞因子，已被证明可以抑制心肌成纤维细胞的增殖和Ⅰ型和Ⅲ型胶原的表达[28]。本实验研究表明，桂枝汤各组能降低TNF-α，IL-6 mRNA水平，并且升高IL-10 mRNA水平，且桂芍1∶1组改善炎症效果优于2∶1组。综上可知，桂枝汤改善心肌纤维化的机制可能与抑制TNF-α，IL-6 mRNA表达和升高IL-10 mRNA表达有关。
中医学无心肌纤维化的病名，可根据其临床表现归属于中医“胸痹”“心悸”等范畴，病机多以肝肾亏虚为本，痰瘀互结为标，多采用补益肝肾、化痰祛瘀等补虚泻实的方法治疗，虽然取得了较大的进展[29-30]，但是为进一步提高中医药改善心肌纤维化的临床水平，仍需对其病因病机与治疗做新的探索。《难经·十四难》云：“损其心者，调其营卫”，李晓教授指出心系疾病可从“营卫不和”的角度考虑[31]。营卫主要的功能是布散渗灌气血，濡养心脉心体，营养四肢百骸。《黄帝内经·灵枢·痈疽》曰：“营气稽留于经脉之中，则血涩而不行，不行则卫气从之而不通。”营卫不和则会导致气血运行不畅，血瘀水停，水聚成痰[32-33]。从中西医结合角度分析，心肌纤维化会导致心肌组织的缺血缺氧，以及炎症导致的局部血液运行不畅，这些病理变化特征与营卫的“渗灌气血”功能降低有着很大的相关性。因此，调和营卫可从整体出发，调和气血阴阳，化痰行瘀利水，从而在临床中可作为改善心肌纤维化的主要治则，桂枝汤为“滋阴和阳，调和营卫”之总方，可使营卫和谐，机体达到阴阳自和的状态。
综上所述，调和营卫的桂枝汤对盐敏感大鼠的心肌纤维化有良好的改善作用，其作用机制可能与调节TGF-β1/Smads信号通路和减轻炎症反应有关。其具体的机制研究正在进行中。
Guizhitang inhibits cholinergic transdifferentiation by regulating imbalance of NGF and LIF in salt-sensitive hypertensive heart failure rats
[J]．Chin J Integr Med，2019，doi: 10.1007/s11655-019-2706-6.