菖蒲郁金汤对帕金森病小鼠的神经保护作用及机制探讨
中医药现代化论著
菖蒲郁金汤对帕金森病小鼠的神经保护作用及机制探讨
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［目的］
观察菖蒲郁金汤对帕金森病（Parkinson's disease，PD）小鼠的治疗作用以及对多巴胺（dopamine，DA）能神经元的保护作用，并探讨其可能的作用机制。
［方法］
将36只C57BL/6雄性小鼠随机分为正常对照组、MPTP模型组、菖蒲郁金汤组，每组12只。MPTP模型组和菖蒲郁金汤组采用1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶（1-methyl-4-phenyl-1，2，3，6-tetrahydropyridine，MPTP）腹腔注射，30 mg/（kg·d），连续7 d，建立PD小鼠模型，正常对照组给予等量0.9%氯化钠溶液腹腔注射，连续7 d。菖蒲郁金汤组在MPTP注射的同时开始给予20 g/（kg·d）菖蒲郁金汤灌胃21 d，MPTP模型组和正常对照组分别在MPTP、0.9%氯化钠溶液注射的同时给予20 g/（kg·d）的0.9%氯化钠溶液灌胃21 d。最后给药结束后1、7和14 d时对各组小鼠分别进行行为学评价。14 d时处死小鼠，取小鼠中脑黑质部位脑组织，应用酪氨酸羟化酶免疫组化染色检测DA能神经元存活数目，免疫印迹法检测α-突触核蛋白（α-synuclein，α-Syn）和自噬特异性蛋白微管相关蛋白1轻链3B（microtubule-associated protein 1 light chain 3 Beta，LC3B）的蛋白表达；取纹状体脑组织，电镜观察神经元超微结构变化及自噬小体。
［结果］
与MPTP模型组比较，菖蒲郁金汤组小鼠1、7、14 d时爬杆时间缩短（均P<0.05），旷场试验的总距离和旷场平均速度均增加（均P<0.01），7、14 d时悬挂实验分值增加（均P<0.05）；菖蒲郁金汤组小鼠中脑黑质DA神经元存活数目增加（P<0.01），而且染色浓度增加，α-Syn蛋白表达下调（P<0.01），微管相关蛋白1轻链3B-Ⅱ（microtubule-associated protein 1 light chain 3 Beta-Ⅱ，LC3B-Ⅱ）/微管相关蛋白1轻链3B-Ⅰ（microtubule-associated protein 1 light chain 3 Beta-Ⅰ，LC3B-Ⅰ）比值增加（P<0.01）。电镜显示，与MPTP模型组比较，菖蒲郁金汤组纹状体神经元胞质水肿、空泡变性现象减轻，线粒体膜结构相对完整，可见自噬溶酶体。
［结论］
菖蒲郁金汤可有效减轻PD小鼠行为症状，对DA能神经元具有保护作用，通过增强神经元细胞的自噬活性从而促进异常聚集α-Syn的自噬性清除可能是其主要作用机制。
帕金森病菖蒲郁金汤多巴胺能神经元自噬α-突触核蛋白神经保护纹状体中脑黑质
