中药升降浮沉理论概括了药物对人体作用的趋向性，主要解释中药对于疾病病症、病势发展趋向的影响［1］。“升”即上升提举，趋向于上；“降”即下达降逆，趋向于下；“浮”即向外发散，趋向于外；“沉”即向内收敛，趋向于内［2］。升浮中药多主上行而向外，有升阳、发表、散寒、涌吐等作用；沉降中药多主下行而向内，有潜阳、降逆、泻下、渗湿等功效。因此，在临床用药时，病位在上在表者宜升浮不宜沉降，病位在下在里者宜沉降不宜升浮，病势上逆者宜降不宜升，病势下陷者宜升不宜降［3］。但升降浮沉药性理论仍是抽象的，概念多为医家经验所记载，缺乏具体实验数据的阐释。临床用药应遵循“顺病位、逆病势”的辨证思想［4］。基于药物的升降浮沉性能和“顺病位、逆病势”的用药原则，推测典型升浮中药对病位在上在表以及病势下陷病症作用的靶点可能为升浮药性的潜在作用靶点，典型沉降中药对病位在下在里以及病势上逆病症作用的靶点可能为沉降药性的潜在作用靶点。
本课题组前期研究发现，温热性中药能促进能量代谢，寒凉性中药能抑制能量代谢［5］。因此，本课题组根据前期研究结果［6-7］，选用临床上常用典型升浮中药（麻黄、柴胡、升麻、葛根、桔梗、薄荷）及沉降中药（葶苈子、丁香、苦杏仁、旋覆花、茯苓、刀豆、川牛膝），采用网络药理学和体内实验验证的方法探究升浮中药和沉降中药的潜在靶点。本研究通过河南中医药大学动物伦理委员会伦理审批，伦理号：DWLL2018080003。
1 材料
1.1 动物
SPF级SD大鼠雄性140只，体质量180～220 g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，实验动物生产许可证号：SCXK（京）2016-0011。饲养于清洁级动物房中，12 h光照，恒温24 ℃，湿度35%，自由饮食、饮水。
1.2 药物
典型升浮中药包括麻黄、柴胡、升麻、葛根、薄荷、桔梗，典型沉降中药包括丁香、苦杏仁、川牛膝、茯苓、刀豆、旋覆花、葶苈子。均取1 kg的药材，麻黄、柴胡、升麻、葛根、桔梗、薄荷、川牛膝、茯苓、丁香和旋覆花提前10倍量水浸泡30 min，葶苈子、刀豆和苦杏仁提前10倍量水浸泡50 min，然后水煎煮两次，每次1 h，合并滤液，纱布过滤后，滤液浓缩，得到各药材的水煎液总提物，含生药材浓度分别为0.42、0.7、0.7、1.05、0.42、0.7、0.21、0.7、0.7、1.05、0.63、0.63、0.7、0.7 g/ml。
1.3 主要试剂与仪器
SDS-PAGE凝胶制备试剂盒（货号：64136301），美国Bio-Rad公司；一抗毒蕈碱乙酰胆碱受体M3（CHRM3，货号：A1602）、毒蕈碱乙酰胆碱受体M1（CHRM1，货号：A12323）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPAR-γ，货号：A0270）、β肌动蛋白（β-actin抗体，货号：AC026），ABclonal公司；二抗山羊抗兔（货号：925-68071）和山羊抗鼠（货号：925-32210），美国Li-Cor公司；HiScript III RT SuperMix（货号：R323-01）、ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix（货号：Q711-02），南京诺维赞生物科技股份有限公司；总RNA提取试剂盒（货号：R1200）、全蛋白提取试剂盒（货号：BC3710）、BCA蛋白浓度测定试剂盒（货号：PC0020），北京索莱宝科技有限公司。
ABI QuantStudio 5型实时荧光定量PCR系统（美国赛默飞世尔公司）；BioTek型多功能酶标仪（美国伯腾仪器有限公司）；BX53型显微镜（日本OLYMPUS公司）；Odyssey-CLx型双色红外荧光成像系统（美国Li-Cor公司）。
2 方法
2.1 网络药理学研究
2.1.1 典型升浮中药和沉降中药相关靶点筛选
通过中药系统药理学数据库与分析平台Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology（TCMSP，https：//tcmspw.com/tcmsp.php），以“麻黄”“柴胡”“升麻”“葛根”“桔梗”“薄荷”“葶苈子”“旋覆花”“川牛膝”“茯苓”“丁香”“苦杏仁”和“刀豆”为关键词检索其化学成分，并以口服生物利用度（OB）≥30%，类药性（DL）≥0.18为标准进行活性成分筛选，利用TCMSP检索收集活性成分所对应靶点。基于Uniprot数据库（https：//www.uniprot.org/）和Perl 5.30.2.1软件将已筛选出的靶蛋白名称进行基因注释。
2.1.2 病症潜在靶点的筛选
病位：1）风寒表证和风水水肿病位均在表。风寒表证是指由于风寒袭表、肺气不宣而出现的病位在表病证［8］；风水水肿是由于风邪袭肺，肺失宣肃，不能通调水道，表现为发病较快、水肿发展迅速并伴有风邪表证的病证［9］。2）痰饮停聚和肺水病位均在里。痰饮停聚指痰饮内伏于肺，遇外淫、饮食、情志、劳倦等诱因而引触，以致痰阻气道，肺失肃降，肺气上逆，痰气搏击而发出痰鸣气喘声，久而久之会出现气喘咳逆、面赤、头晕目眩等痰热内郁表现［10］；肺水是由于水停不化、肺气不得肃降，肺之输布津液功能失调，出现水液代谢异常、其形如肿等症状［11］。
病势：1）胃缓和心衰病势均向下。心衰是由于胸中大气虚极下陷，心司呼吸、贯心脉的功能受损引起的病症［12］；胃缓是由于脾胃虚弱，中气下陷，升提失司而至虚损下坠的病症［13］。2）呕吐和肝阳上亢病势均向上。呕吐是由胃失和降，气逆于上所致的病证［14］；肝阳上亢的主要病因病机与肝肾两脏的阴阳偏盛和偏衰有关，并以“阴虚阳亢”为中心，表现为上实下虚之候［15］。
基于GeneCards数据库（https：//www.genecards.org/），以“风寒表证”“风水水肿”“痰饮停聚”“肺水”“胃缓”“心衰”“呕吐”和“肝阳上亢”为关键词进行检索疾病靶点。
2.1.3 药物-病症交集靶点筛选
通过jvenn（http：//jvenn.toulouse.inra.fr/app/example.html）将典型升浮中药有效靶点与“风寒表证”“风水水肿”“胃缓”和“心衰”相关的病症靶点进行映射建立Venn图，筛选升浮中药潜在靶点；将典型沉降中药有效靶点与“痰饮停聚”“肺水”“呕吐”和“肝阳上亢”相关的病症靶点进行映射建立Venn图，筛选沉降中药潜在靶点。
2.2 动物实验研究
2.2.1 动物分组及给药
雄性SD大鼠140只，适应性喂养1周后根据体质量由大到小依次进行分组，第一次从第一组开始直到最后一组，每组1只，第二次从第二组开始直到最后一组，然后再将第一组补齐2只，依次进行直至将大鼠均匀分到每组。分为正常对照组、麻黄组（4.2 g/kg）、柴胡组（7 g/kg）、升麻组（7 g/kg）、葛根组（10.5 g/kg）、薄荷组（4.2 g/kg）、桔梗组（7 g/kg）、丁香组（2.1 g/kg）、苦杏仁组（7 g/kg）、川牛膝组（7 g/kg）、茯苓组（10.5 g/kg）、刀豆组（6.3 g/kg）、旋覆花组（6.3 g/kg）、葶苈子组（7 g/kg），每组10只。参照课题组前期对寒热药性研究的给药剂量，结合麻黄具强烈的发汗作用和不可多服、令人虚的特征［16］，除麻黄外其余药物均参考《中华人民共和国药典（2020年版）》［17］人用量折算为鼠的用量［18］的42倍量进行给药，麻黄为28倍量。正常对照组大鼠灌胃1 ml/100 g蒸馏水。各组均每天1次，持续14天。
2.2.2 实时荧光定量PCR检测大鼠肺组织药物-病症交集靶点mRNA表达
根据网络药理学研究结果，14天后提取大鼠肺组织总RNA，使用HiScript III RT SuperMix预混液进行逆转录得到cDNA，最后采用ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix预混液，以实时荧光定量PCR对CHRM3、CHRM1、PPAR-γ、糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）、己糖激酶2（HK-2）和胰岛素生长因子2（IGF-2）的mRNA水平进行分析，采用2-ΔΔCt法，以GAPDH为内参基因计算mRNA相对表达量。大鼠引物序列见表1，引物由武汉塞维尔生物有限公司设计合成。
| 名称 | 上游引物序列 （5'-3'） | 下游引物序列 （5'-3'） | 长度/bp |
|---|---|---|---|
| CHRM3 | ACCAGGGCCATCTATTCCATT | ACGGCAGACTCTAACTGGATGG | 224 |
| CHRM1 | GCTGGTTTCCTTCGTTCTCTG | ACACATGACCGTGACAGGGAG | 166 |
| PPAR-γ | CCCTTTACCACGGTTGATTTC | CTTCAATCGGATGGTTCTTCG | 321 |
| GSK-3β | ACCTGCCCTCTTCAACTTTACC | GTGAGGAGGGATAAGGATGGTG | 76 |
| HK-2 | TTGCGGACCGTGTTTGATGT | CTTGAGGCGCTCTGAGATGC | 171 |
| IGF-2 | CCGTGGCATCGTGGAAGAGT | CTCCAGGTGTCGAATTTGAAGAAC | 171 |
| GAPDH | CTGGAGAAACCTGCCAAGTATG | GGTGGAAGAATGGGAGTTGCT | 138 |
2.2.3 Western Blot检测大鼠肺组织CHRM3、CHRM1和PPAR-γ蛋白表达
在检测典型升浮和沉降中药对CHRM3、CHRM1、PPAR-γ、GSK-3β、HK-2和IGF-2 mRNA表达的影响时，发现典型升浮和沉降中药对CHRM3、CHRM1和PPAR-γ具有较强的规律性，因此选择这3个指标继续观察蛋白表达。取大鼠肺组织，采用全蛋白提取试剂盒提取总蛋白，并使用BCA法进行蛋白定量。每孔蛋白上样量60 μg进行10% SDS-PAGE凝胶电泳，半干法电转移至PVDF膜，封闭1.5 h后，加入一抗CHRM3、CHRM1和PPAR-γ抗体，稀释比例均为1∶1000，4 ℃孵育过夜，回收一抗，PBST洗5次，每次5 min，加入二抗，稀释比例为1∶20 000~1∶30 000，室温孵育1 h，PBST洗3次，每次5 min。Odyssey双色红外荧光成像系统进行成像，采用Image Studio 5.2.5软件进行数据分析。
2.2.4 免疫组化法检测大鼠肺组织CHRM3、CHRM1和PPAR-γ蛋白表达
将新鲜肺组织标本经组织固定液固定等步骤制成蜡块，5 μm切片，然后脱蜡、水化，柠檬酸盐缓冲液回收抗原，3%H2O2封闭内源性过氧化物酶20 min，冲洗后微波加热修复抗原，3%BSA封闭30 min，滴加一抗（1∶200稀释）于4 ℃过夜，洗涤，滴加生物素标记的羊抗兔二抗（1∶2000稀释）室温孵育1 h，DAB显色，苏木精复染3 min。将切片依次放入75%酒精5 min，85%酒精5 min，无水乙醇I5 min，无水乙醇II 5 min，二甲苯5 min中脱水透明，晾干切片，最后中性树胶封片。显微镜镜检，图像采集分析。
2.3 统计学方法
采用SPSS 26.0软件进行数据分析，实验数据均符合正态分布以（
3 结果
3.1 典型升浮中药和沉降中药的网络药理学研究结果
图1示，典型升浮中药共有的靶点9个，为NCOA1、PRSS1、AR、IGF-2、HK-2、PGR、NCOA2、PTGS1和PLAU；典型沉降中药共有的靶点10个，为CHRM1、PPAR-γ、NR3C2、CHRM3、AKR1B1、GSK-3β、PGR、NCOA2、PTGS1和PLAU；排除升浮中药和沉降中药共有靶点后，升浮中药共有且特有的靶点为NCOA1、PRSS1、AR、IGF-2、HK-2，沉降中药共有且特有的靶点为CHRM1、PPAR-γ、NR3C2、CHRM3、AKR1B1、GSK-3β。图2示，将病位在表的风水水肿和风寒表证以及病势下陷的胃缓和心衰疾病靶点取交集得到413个共有基因，将病位在里的肺水和痰饮停聚以及病势上逆的呕吐和肝阳上亢疾病靶点取交集得到945个共有基因。
将升浮中药与病位在表和病势下陷病症靶点的交集靶点有IGF2和HK2，即升浮中药的潜在靶点有IGF-2和HK-2，沉降中药与病位在里和病势上逆病症靶点交集基因有PPAR-γ、CHRM3、CHRM1和GSK-3β，即沉降中药潜在的靶点有PPAR-γ、CHRM3、CHRM1和GSK-3β。
3.2 各组大鼠肺组织CHRM3、GSK-3β、HK-2、PPAR-γ、IGF-2和CHRM1 mRNA表达比较
表2、表3示，与正常对照组比较，除薄荷组外，其余升浮中药组大鼠CHRM3 mRNA水平均显著降低，沉降中药丁香组和刀豆组CHRM3 mRNA水平显著降低，苦杏仁组CHRM3 mRNA水平显著升高（P＜0.05或P＜0.01）；麻黄组、柴胡组、桔梗组、葶苈子组、旋覆花组和苦杏仁组GSK-3β mRNA水平显著升高，升麻组、葛根组、薄荷组和茯苓组GSK-3β mRNA水平显著降低（P＜0.01）；旋覆花组、川牛膝组、丁香组HK-2 mRNA水平显著升高，柴胡组、升麻组、葛根组、桔梗组、薄荷组、茯苓组、苦杏仁组和刀豆组HK-2 mRNA水平显著降低（P＜0.05或P＜0.01）；升浮中药除柴胡组和薄荷组外其余各药物组PPAR-γ mRNA水平显著降低，沉降中药除葶苈子组、丁香组和刀豆组外其余各药物组PPAR-γ mRNA水平显著升高（P＜0.01）；葶苈子组、川牛膝组和刀豆组及升浮中药除薄荷组外其余各药物组IGF-2 mRNA水平显著降低，薄荷组、茯苓组、丁香组和苦杏仁组IGF-2 mRNA水平显著升高（P＜0.05或P＜0.01）；葛根组和桔梗组CHRM1 mRNA水平显著降低（P＜0.01），薄荷组及沉降中药各药物组CHRM1 mRNA水平显著升高（P＜0.05或P＜0.01）。
| 组别 | 鼠数 | CHRM3 | GSK-3β | HK-2 | PPAR-γ | IGF-2 | CHRM1 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 正常对照组 | 10 | 1.00±0.08 | 1.00±0.02 | 1.00±0.02 | 1.00±0.06 | 1.00±0.10 | 1.00±0.11 |
| 麻黄组 | 10 | 0.87±0.01a） | 1.17±0.03b） | 1.00±0.05 | 0.88±0.02b） | 0.82±0.04b） | 0.73±0.12 |
| 柴胡组 | 10 | 0.50±0.03b） | 1.15±0.02b） | 0.72±0.01b） | 1.03±0.01 | 0.75±0.03b） | 1.10±0.05 |
| 升麻组 | 10 | 0.72±0.07b） | 0.82±0.03b） | 0.63±0.01b） | 0.73±0.03b） | 0.65±0.07b） | 0.90±0.16 |
| 葛根组 | 10 | 0.50±0.06b） | 0.65±0.06b） | 0.70±0.13b） | 0.60±0.01b） | 0.54±0.05b） | 0.79±0.10b） |
| 桔梗组 | 10 | 0.83±0.02b） | 1.12±0.01b） | 0.80±0.01b） | 0.86±0.04b） | 0.58±0.05b） | 0.56±0.00b） |
| 薄荷组 | 10 | 1.06±0.06 | 0.76±0.01b） | 0.54±0.02b） | 1.17±0.07 | 1.32±0.09b） | 1.68±0.40b） |
| 组别 | 鼠数 | CHRM3 | GSK-3β | HK-2 | PPAR-γ | IGF-2 | CHRM1 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 正常对照组 | 10 | 1.00±0.05 | 1.00±0.07 | 1.00±0.03 | 1.00±0.04 | 1.00±0.02 | 1.00±0.04 |
| 葶苈子组 | 10 | 0.96±0.05 | 1.16±0.06b） | 0.90±0.03 | 1.05±0.06 | 0.76±0.01b） | 1.88±0.08b） |
| 旋覆花组 | 10 | 0.96±0.07 | 1.15±0.03b） | 1.24±0.03b） | 1.48±0.05b） | 1.01±0.02 | 1.38±0.08a） |
| 川牛膝组 | 10 | 0.97±0.05 | 1.06±0.07 | 1.13±0.01a） | 1.14±0.03b） | 0.91±0.04b） | 1.45±0.27a） |
| 茯苓组 | 10 | 0.88±0.07 | 0.87±0.01b） | 0.76±0.18b） | 1.32±0.08b） | 1.07±0.03a） | 1.90±0.22b） |
| 丁香组 | 10 | 0.86±0.05a） | 0.94±0.04 | 1.24±0.02b） | 0.97±0.05 | 1.17±0.04b） | 1.85±0.04b） |
| 苦杏仁组 | 10 | 1.22±0.13b） | 1.25±0.05b） | 0.66±0.02b） | 1.46±0.02b） | 1.43±0.06b） | 2.04±0.40b） |
| 刀豆组 | 10 | 0.69±0.04b） | 1.01±0.03 | 0.77±0.04b） | 1.07±0.04 | 0.79±0.04b） | 1.45±0.07a） |
3.3 各组大鼠肺组织CHRM3、CHRM1和PPAR-γ蛋白表达Western Blot检测结果比较
表4、表5示，与正常对照组比较，升浮中药各组以及沉降中药丁香组、刀豆组CHRM3蛋白水平显著降低，苦杏仁组CHRM3蛋白水平显著升高（P＜0.05或P＜0.01）；升浮中药葛根组和桔梗组CHRM1蛋白水平显著降低，沉降中药各药物组CHRM1蛋白水平显著升高（P＜0.05或P＜0.01）；升浮中药除柴胡组和薄荷组外其余各药物组PPAR-γ蛋白水平显著降低，沉降中药除葶苈子组、丁香组和刀豆组外其余各药物组PPAR-γ蛋白水平显著升高（P＜0.05或P＜0.01）。各组大鼠肺组织CHRM3、CHRM1、PPAR-γ蛋白电泳图见附件（请扫描本文二维码获取）。
| 组别 | 鼠数 | CHRM3 | CHRM1 | PPAR-γ |
|---|---|---|---|---|
| 正常对照组 | 10 | 1.00±0.13 | 1.00±0.10 | 1.00±0.13 |
| 麻黄组 | 10 | 0.68±0.13a） | 0.83±0.16 | 0.71±0.02b） |
| 柴胡组 | 10 | 0.48±0.18b） | 0.92±0.13 | 1.10±0.16 |
| 升麻组 | 10 | 0.52±0.20b） | 0.88±0.22 | 0.68±0.11b） |
| 葛根组 | 10 | 0.61±0.14b） | 0.44±0.10b） | 0.71±0.16b） |
| 桔梗组 | 10 | 0.72±0.03a） | 0.62±0.17a） | 0.64±0.11b） |
| 薄荷组 | 10 | 0.61±0.08a） | 0.90±0.23 | 2.09±0.29b） |
| 组别 | 鼠数 | CHRM3 | CHRM1 | PPAR-γ |
|---|---|---|---|---|
| 正常对照组 | 10 | 1.00±0.07 | 1.00±0.04 | 1.00±0.08 |
| 葶苈子组 | 10 | 0.92±0.06 | 1.49±0.08a） | 1.03±0.06 |
| 旋覆花组 | 10 | 0.93±0.06 | 1.63±0.11a） | 1.23±0.07b） |
| 川牛膝组 | 10 | 0.96±0.04 | 1.62±0.10a） | 1.28±0.08b） |
| 茯苓组 | 10 | 0.91±0.06 | 2.01±0.72b） | 1.15±0.07b） |
| 丁香组 | 10 | 0.78±0.04b） | 2.30±0.15b） | 1.01±0.05 |
| 苦杏仁组 | 10 | 1.10±0.05a） | 2.08±0.10b） | 1.18±0.04a） |
| 刀豆组 | 10 | 0.84±0.04b） | 1.64±0.23a） | 1.01±0.07 |
3.4 各组大鼠肺组织CHRM3、CHRM1和PPAR-γ蛋白表达免疫组化法检测结果比较
表6示，与正常对照组比较，麻黄组、柴胡组、升麻组、葛根组、桔梗组、薄荷组、丁香组和刀豆组CHRM3蛋白表达均显著降低（P＜0.05或P＜0.01）；葛根组和桔梗组CHRM1蛋白表达显著降低，葶苈子组、旋覆花组、川牛膝组、茯苓组、丁香组和刀豆组CHRM1蛋白表达均显著升高（P＜0.05或P＜0.01）；麻黄组、葛根组、桔梗组和刀豆组PPAR-γ蛋白表达均显著降低，旋覆花组、川牛膝组和茯苓组PPAR-γ蛋白表达均显著升高（P＜0.05或P＜0.01）。各组大鼠肺组织CHRM3、CHRM1和PPAR-γ蛋白免疫组化图片见附件（请扫描本文二维码获取）。
| 组别 | CHRM3 | CHRM1 | PPAR-γ |
|---|---|---|---|
| 正常对照组 | 1.00±0.15 | 1.00±0.22 | 1.00±0.19 |
| 麻黄组 | 0.42±0.13a） | 1.02±0.23 | 0.82±0.10b） |
| 柴胡组 | 0.28±0.10a） | 1.00±0.12 | 0.90±0.20 |
| 升麻组 | 0.48±0.07a） | 1.05±0.14 | 0.88±0.10 |
| 葛根组 | 0.38±0.08a） | 0.67±0.12a） | 0.79±0.14a） |
| 桔梗组 | 0.34±0.08a） | 0.51±0.12a） | 0.79±0.08b） |
| 薄荷组 | 0.79±0.14b） | 0.84±0.04 | 0.97±0.15 |
| 葶苈子组 | 0.92±0.12 | 1.34±0.24a） | 0.86±0.11 |
| 旋覆花组 | 0.88±0.14 | 1.60±0.13a） | 1.30±0.19a） |
| 川牛膝组 | 0.90±0.07 | 1.24±0.07b） | 1.37±0.15a） |
| 茯苓组 | 0.89±0.16 | 1.25±0.13b） | 1.36±0.12a） |
| 丁香组 | 0.75±0.04a） | 1.46±0.07a） | 0.90±0.17 |
| 苦杏仁组 | 1.09±0.20 | 1.15±0.14 | 1.13±0.20 |
| 刀豆组 | 0.70±0.16a） | 1.24±0.20b） | 0.70±0.10a） |
4 讨论
升降浮沉药性理论在临床遣方用药过程中发挥着重要的作用。临床用药应遵循“顺病位、逆病势”的辨证思想，利用药势调节脏腑气机紊乱，使之恢复正常的生理功能，亦或作用于机体的不同部位以因势利导、驱邪外出，从而达到治疗疾病的目的［4］。本研究选择升浮中药（麻黄、柴胡、升麻、葛根、桔梗、薄荷）对病位在表（风寒表证、风水水肿）及病势下陷病症（胃缓、心衰）采用网络药理学方法对升浮中药潜在作用靶点进行研究，选择沉降中药（葶苈子、旋覆花、刀豆、川牛膝、茯苓、苦杏仁、丁香）对病位在里（肺水、痰饮停聚）及病势上逆病症（呕吐、肝阳上亢）采用网络药理学方法对沉降中药潜在作用靶点进行研究。结果发现，升浮中药和病位在表、病势下陷病症共同靶点有IGF-2和HK-2，且这2个靶点是沉降中药不具有的；沉降中药和病位在里、病势上逆病症共同靶点有CHRM3、CHRM1、PPAR-γ和GSK-3β，且这4个靶点是升浮中药不具有的。基于药物的升降浮沉性能和“顺病位、逆病势”治疗原则，初步推测IGF-2和HK-2可能为升浮中药潜在作用靶点，CHRM3、CHRM1、PPAR-γ和GSK-3β可能为沉降中药潜在作用靶点。因此，对此6个靶点进行了动物实验研究，以验证网络药理学预测的靶点。
动物实验结果表明，升浮中药除薄荷外均可显著抑制大鼠肺组织CHRM3 mRNA及蛋白的表达，沉降中药除丁香、苦杏仁和刀豆外其余各药物对CHRM3 mRNA及蛋白表达作用不显著。升浮中药除薄荷和柴胡外其余各药物对PPAR-γ和CHRM1的表达整体呈现抑制作用，沉降中药除丁香和刀豆外可整体促进大鼠肺组织PPAR-γ和CHRM1的表达。升浮中药和沉降中药对大鼠肺组织GSK-3β、HK-2和IGF-2的表达不具明显规律性。因此，升浮中药和沉降中药对网络药理学预测靶点作用规律较为显著的是CHRM3、CHRM1和PPAR-γ。CHRM3和CHRM1为毒蕈碱型乙酰胆碱受体，乙酰胆碱受体是一种跨膜蛋白受体，结合神经递质乙酰胆碱而起到信号传递的作用。其中M受体主要分布在副交感神经纤维所支配的效应器上，乙酰胆碱作用于M受体时主要表现为心脏活动的抑制、促进汗腺分泌、肺血管松弛等［19］。CHRM1可引起气道狭窄、气道上皮细胞增生、气道炎症和肺血管松弛［20］。气的升降出入离不开肺、脾、肾，肺主气、司呼吸，肺气的升降出入运动对全身气机具有重要的调节作用。肺主宣发功能可以使津液和水谷精微布散周身、外达皮毛，也可将津液化为汗液排出体外。故而推测，CHRM1和CHRM3可能与肺气的宣发生理功能有关。PPAR-γ是核激素受体超家族的一部分，在能量、葡萄糖及脂质代谢，炎症基因表达与脂肪生成等过程中发挥着关键作用［21］。肝主疏泄和藏血，肝主疏泄对气机的调畅与否具有重要作用，同时影响着津血运行和脾胃运化。因此推测，PPAR-γ可能与肝主疏泄的生理功能相关。
综上，本研究采用网络药理学方法筛选出IGF-2和HK-2可能是升浮中药的潜在作用靶点，CHRM3、CHRM1、PPAR-γ和GSK-3β可能为沉降中药的潜在作用靶点。升浮中药和沉降中药对正常动物的影响主要体现在CHRM3、CHRM1和PPAR-γ靶点。本研究尚存在局限性，因为中药升降浮沉药性理论主要针对疾病而言，所以在正常动物体内研究找到升浮中药和沉降中药的规律后，还需采用相应的动物模型对升浮中药和沉降中药的作用规律进行验证。因此，我们下一步将采用某一味升浮或沉降中药对应的动物模型，对其升浮或沉降药性的潜在作用靶点进一步研究以验证升浮和沉降中药的作用规律。
张贝贝,曾梦楠,王亚玺等.典型升浮中药和沉降中药潜在作用靶点网络药理学及大鼠体内验证研究[J].中医杂志,2023,64(02):174-181.
ZHANG Beibei,ZENG Mengnan,WANG Yaxi,et al.Network Pharmacology and In Vivo Validation of Potential Targets of Typical Ascending and Floating， Descending and Sinking Chinese Medicinals[J].Journal of Traditional Chinese Medicine,2023,64(02):174-181.
