1　材料

2 　方法

3　结果

3.3　清温并用法对大鼠结肠组织FoxP3，ROR-γt mRNA表达的影响

与正常组比较，模型组FoxP3，ROR-γt mRNA表达在1，12，24 h各时间点均显著升高(P<0.01)；与模型组比较，清法组、温法组FoxP3，ROR-γt mRNA表达各时间点表达均有降低(P<0.05)，其中清温并用法组显著下降(P<0.01)。清温并用法FoxP3，ROR-γt mRNA表达较清法组、温法组有所下降(P<0.05)。见表4，图1，图2。

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清温并用法对大鼠结肠组织FoxP3 mRNA表达的影响(原位杂交，×400)

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清温并用法对大鼠结肠组织ROR-γt mRNA表达的影响(原位杂交，×400)

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清温并用法对大鼠结肠组织FoxP3，ROR-γt mRNA表达的影响($\overline{x}$±s)

组别	剂量/g·kg-1	n	FoxP3			ROR-γt
			1 h	12 h	24 h	1 h	12 h	24 h
正常	-	10	0.247±0.021	0.247±0.021	0.247±0.021	0.205±0.026	0.205±0.026	0.205±0.026
模型	-	5	0.406±0.042)	0.573±0.0632)	0.631±0.0722)	0.388±0.0372)	0.588±0.0632)	0.657±0.0772)
清法	6.68	6	0.350±0.043)	0.500±0.0593)	0.560±0.0663)	0.340±0.0363)	0.510±0.0593)	0.571±0.0673)
温法	7.09	6	0.352±0.043)	0.511±0.0663)	0.570±0.0623)	0.342±0.0493)	0.518±0.0543)	0.579±0.0653)
清温并用法	19.53	7	0.292±0.044，5，7)	0.420±0.0494，5，7)	0.480±0.0574，5，7)	0.262±0.0454，5，7)	0.432±0.0464，5，7)	0.471±0.0514，5，7)

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3.4　清温并用法对大鼠结肠组织FoxP3，ROR-γt蛋白表达的影响

与正常组比较，模型组FoxP3，ROR-γt蛋白表达在1，12，24 h各时间点显著升高(P<0.01)；与模型组比较，清法组、温法组FoxP3，ROR-γt蛋白表达有所下降(P<0.05)，清温并用法组显著减少(P<0.01)；清温并用法FoxP3，ROR-γt蛋白表达低于清法组、温法组(P<0.05)。见表5，图3，图4。

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清温并用法对大鼠结肠组织FoxP3蛋白表达的影响(免疫组化，×400)

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清温并用法对大鼠结肠组织ROR-γt蛋白表达的影响(免疫组化，×400)

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清温并用法对大鼠结肠组织FoxP3，ROR-γt蛋白表达的影响($\overline{x}$±s)

组别	剂量/g·kg-1	n	FoxP3			ROR-γt
			1 h	12 h	24 h	1 h	12 h	24 h
正常	-	10	0.181±0.015	0.181±0.015	0.181±0.015	0.153±0.014	0.153±0.014	0.153±0.014
模型	-	5	0.326±0.0392)	0.483±0.0492)	0.546±0.0532)	0.310±0.0442)	0.501±0.0502)	0.580±0.0692)
清法	6.68	6	0.282±0.0293)	0.411±0.0553)	0.472±0.0523)	0.261±0.0303)	0.448±0.0573)	0.508±0.0603)
温法	7.09	6	0.284±0.0393)	0.421±0.0483)	0.484±0.0683)	0.260±0.0303)	0.452±0.0533)	0.511±0.0683)
清温并用法	19.53	7	0.241±0.0364，5，7)	0.357±0.0394，5，7)	0.396±0.0444，5，7)	0.210±0.0374，5，7)	0.375±0.0414，5，7)	0.394±0.0464，5，7)

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4　讨论

肝衰竭时，由于肠道菌群失调、内毒素、炎症介质等损伤肠黏膜屏障，使肠黏膜通透性增高，造成肠道细菌和内毒素无法有效代谢而易位，通过门静脉进入肝脏，形成IETM。在肝衰竭病程进展中，约93.3%～100%的患者会出现IETM^[12]。IETM介导的“二次打击”在肝衰竭中后期会引起肝细胞大量坏死，使肝功能严重受损。此外，IETM可成为炎症介质的起源，进而诱发全身炎症反应，进一步加重病情，严重影响肝衰竭的治疗和预后^[13]。因此，肝衰竭中后期的治疗重点在于如何有效的防治IETM。

Treg，Th17细胞作为CD4^＋细胞新亚群，是目前炎症反应调控研究的热点^[14]。Treg细胞和Th17细胞源于初始的CD4^＋T细胞(Th0)在分化与功能上相互拮抗，二者可由特异性转录因子FoxP3，ROR-γt调控分化，分别起着促进炎症和抑制炎症的作用，关系密切，其平衡变化影响着免疫应答及炎症反应的结局。Treg可表达影响转录因子FoxP3，主要通过释放细胞因子IL-10，TGF-β，IL-35等，发挥抑炎作用。Th17可表达影响转录因子ROR-γt，主要分泌IL-17A，IL-17F及低水平的IL-23，TNF-α，IL-6，诱发炎症反应，发挥促炎作用。在正常情况下，机体内Treg和Th17细胞及Treg/Th17是保持平衡的，确保机体的免疫反应处于稳定状态。但肝衰竭时，Treg/Th17细胞比例失衡，Treg细胞数目减少，Th17细胞增多，促炎作用占主导地位。针对HBV-ACLF患者Treg/Th17细胞失衡，早期干预促进平衡恢复，对调控免疫炎症反应，减轻肝损伤，降低肝衰竭病死率具有重要意义。

肝衰竭的中医病机演变规律可归纳为“湿热-热毒致瘀-瘀毒互结”，早期以实证为主，以湿、热、瘀、毒显著，中晚期则虚实夹杂，瘀、毒、虚交织^[7，15]，治疗以清热利湿，解毒化瘀为主，辅以温阳健脾^[16-17]。温阳解毒化瘀方(即清温并用法)由茵陈、白术、黑附片、丹参、赤芍、薏米组成。方中重用赤芍以活血化瘀，配茵陈以利湿退黄，共为君药；丹参功能活血凉血、袪瘀止痛。附片大辛大热，温补脾肾，可防茵陈、赤芍、丹参寒凉太过，共为臣药。再佐以白术、薏米以燥湿健脾益气，防诸药损伤脾胃，诸药合用，共奏热利湿，解毒化瘀，温阳健脾的之功。

本实验通过观察肝衰竭IETM大鼠外周血Treg/Th17及结肠组织FoxP3，ROR-γt表达，造模后，与正常组比较，模型组大鼠Treg/Th17细胞比例失衡，向Th17方向偏移，结肠组织FoxP3，ROR-γt表达增多，FoxP3/ROR-γt mRNA倒置。通过清法、温法、清温并用法干预后，仅清温并用法可有效调节Treg/Th17细胞失衡向Treg方向恢复，使Treg/Th17细胞比值升高。与模型组比较，清法、温法、清温并用法各组ROR-γt，FoxP3表达均下降，其中以清温并用法组降低最明显，且对ROR-γt表达的抑制作用高于FoxP3。

综上所述，肝衰竭Treg/Th17细胞失衡，FoxP3，ROR-γt表达异常，导致炎症反应失控，加重病情。清温并用法可改善肝衰竭IETM，其机制可能与通过调控FoxP3，ROR-γt的表达，促进Treg/Th17细胞失衡向Treg方向恢复有关。本研究阐释了FoxP3，ROR-γt与肝衰竭IETM的相关性，为中医药防治肝衰竭IETM提供新的治疗思路及方法，但是否还存在其他调控通路有待进一步研究。