安息香为安息香科植物白花树的干燥树脂。具有开窍醒神、行气活血、止痛的功效[1]。安息香天然分布于我国的广东、广西、云南、贵州、重庆、江西、湖南以及福建等省(区、市)[2]。目前，国内外对安息香化学成分的研究较少，主要化学成分有三萜类、木脂素和香脂酸类[3-4]。2015年版《中国药典》中关于安息香含量测定也仅针对香脂酸类化合物，指标成分单一。现代大部分药理研究表明安息香提取物有显著的抗炎解热[5]，促进血脑屏障[6]，抗动脉粥样硬化[7]，抗肿瘤等药理活性[8]，但很少对其具体的有效成分进行相关研究。课题组前期研究发现安息香部分化合物具有较好的抗肿瘤活性[9]，表明安息香中化学成分具有重要的研究价值。因此，系统研究安息香的化学成分十分必要，不仅能够丰富该属植物中化学成分的结构类型，为后续展开相关生物活性研究提供物质基础，而且能为药材寻找特征性质控指标成分提供科学依据。本实验对安息香乙酸乙酯的部位进行深入的研究，从中分离并鉴定得到15个化合物，分别鉴定为myricadiol(1)，3-keto-oleanonic acid(2)，(4E)-1，5-bis(4-hydroxyphenyl)-1-methoxy-2-(methoxy-methyl)-4-pentene(3a and 3b)，(E)-p-coumaryl alcohol γ-Ο-methyl ether(4)，芝麻素(5)，5-(3″benzoyloxypropyl)-7-methoxy-2-(3′，4′-methylenedioxy phenyl)-benzofuran(6)，邻苯二甲酸二丁酯(7)，香草酸甲酯(8)，对羟基苯甲醛(9)，对羟基苯乙酮(10)，香草乙酮(11)，3-oxo-olean-11，13(18)-dien-28，19β-olide(12)，香草醛(13)，苯甲酸(14)，逞罗树脂酸(15)。其中化合物1～11为首次从安息香中分离得到，并采用体外肿瘤模型初步评价其抗肿瘤活性。化合物2和12对HepG2，A549，HeLa，MCF-7，PC-3这5种肿瘤细胞均有显著的抑制作用，且都优于阳性药顺铂，表现出潜在的抗肿瘤活性。
1 材料
安息香树脂购于安徽毫州，经广东药科大学中药学院滕希峰讲师鉴定为白花树Styrax tonkinensis的干燥树脂。人肝癌细胞株HepG2，人肺癌细胞株A549，人宫颈癌细胞株HeLa，人乳腺癌细胞株MCF-7，前列腺癌细胞株PC-3(中科院上海生命科学研究院)；CCK-8试剂盒(东仁化学科技有限公司，批号NG638)，DMEM基础培养基、胎牛血清(Gibco公司)，顺铂(Macklin公司，批号C10271916)。石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇(广东光华科技股份有限公司，分析纯)；甲醇(Thermo Fisher，色谱纯)；LH-20型羟丙基葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20，25～100 μm，美国GE Healthcare公司)；柱色谱用硅胶(200～300目，青岛海洋化工集团公司)；RP18反相硅胶(40～60 μm，德国Merck公司)。
MP200型中压快速纯化制备色谱仪(天津博纳艾杰尔科技有限公司)，LC-20A型高效液相色谱仪，CBM-20A型半制备液相色谱仪(日本岛津公司)；ZWF-6型紫外灯(上海金达生化仪器有限公司)；Advance Ⅲ-600型核磁共振谱仪(德国BRUKER公司)，UPLC/Q-Tof 6230型质谱仪(美国Agilent公司)。ELX800型全自动酶标仪(BicTek Instruments公司)
2 方法
2.1 提取与分离
安息香干燥树脂加入95%乙醇静置提取3次，每次24 h，提取液减压浓缩干燥，得到总提取物，总提取物用温水充分混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯分级萃取，浓缩得极性不同的浸膏。取乙酸乙酯萃取部位浸膏1 kg，正向硅胶色谱分离，洗脱体系石油醚-乙酸乙酯(100∶1～0∶100)梯度洗脱，经TLC，HPLC分析合并，得7个组分(B1～B7)。B2(598 g)经正向硅胶柱色谱(石油醚-乙酸乙酯40∶1～0∶100)梯度洗脱分为7个组分B2.1～B2.7。B2.2经MCI柱(甲醇-水10∶90～100∶0)梯度洗脱分为6个组分(B2.2.1～B2.2.6)，其中B2.2.1经半制备HPLC(甲醇-水35∶65)纯化，得到化合物8(13.72 mg)。B2.2.4经中低压ODS柱(甲醇-水50∶50～100∶0)梯度洗脱分为7个组分(B2.2.4.1～B2.2.4.7)，其中B2.2.4.3经半制备HPLC(甲醇-水75∶25)纯化得到化合物6(14.74 mg)，其中B2.2.4.7用甲醇溶解，静置一夜后有白色絮状物飘在甲醇中间，之后用甲醇反复洗涤，得化合物12(18.54 mg)。B2.2.5经中低压ODS柱(甲醇-水为70∶30～100∶0)梯度洗脱为3个组分(B2.2.5.1～B2.2.5.3)，B2.2.5.1经半制备HPLC(甲醇-水60∶40)纯化，得到化合物7(10.2 mg)。B2.3经MCI柱(甲醇-水10∶90～100∶0)梯度洗脱分为10个组分(B2.3.1～B2.3.10)，其中B2.3.1经ODS色谱柱(甲醇-水30∶70～100∶0)梯度洗脱分为6个组分(B2.3.1.1～B2.3.1.6)，其中B2.3.1.6经半制备HPLC(甲醇-水40∶60)纯化，得到化合物9(6 mg)。B2.3.2经半制备HPLC(甲醇-水55∶45)纯化，得到化合物4(51.4 mg)与13(17.5 mg)。B2.3.3经半制备HPLC(甲醇-水85∶15)分离得15(50 mg)。B2.3.7经半制备HPLC(甲醇-水73∶27)纯化，得到化合物5(8.6 mg)。B2.3.4经半制备HPLC(甲醇-水90∶10)纯化，得到化合物1(3.6 mg)。B2.3.4.3经半制备HPLC(甲醇-水90∶10)，分离得化合物2(923.5 mg)。B2.4经MCI柱色谱(甲醇-水10∶90～100∶0)梯度洗脱分为3个组分(B2.4.1～B2.4.3)，其中B2.4.1经ODS色谱柱(甲醇-水30∶70～100∶0)梯度洗脱分为6个组分(B2.4.1.1～B2.4.1.6)。B2.4.1.2经半制备液相(甲醇-水25∶75)纯化，得到化合物10(6 mg)，B2.4.1.3经半制备HPLC(甲醇-水25∶75)纯化，得到化合物11(17.7 mg)。B2.5经中低压ODS柱(甲醇-水50∶50～100∶0)梯度洗脱分为5个组分(B2.5.1～B2.5.5)，其中B2.5.1经Sep-20凝胶色谱柱分离为6个组分(B2.5.1.1～B2.5.1.6)，B2.5.1.5经半制备液相(甲醇-水30∶70)得化合物14(8.1 mg)。B2.5.2经MCI柱(甲醇-水10∶90～100∶0)梯度洗脱分为8个组分(B2.5.2.1～B2.5.2.8)，B2.5.2.3经Sephadex LH-20(纯甲醇)洗脱纯化分离分为7个组分(B2.5.2.3.1～B2.5.2.3.7)，其中B2.5.2.3.5经半制备HPLC(甲醇-水55∶45)纯化，得到化合物3a(1.5 mg)，化合物3b(5.8 mg)。
2.2 抗肿瘤活性检测
采用CCK-8法测定细胞的活力[10]。分别取对数生长期的肿瘤细胞包括HepG2，A549，HeLa，MCF-7，PC-3进行消化，得到细胞悬液后计数，按照计数结果将细胞浓度调整为大约1×104个/mL，以每孔100 μL分别接种于96孔板中，在5%CO2，37 ℃条件下的细胞培养箱中培养24 h后，将上清液吸弃。再把不同浓度的阳性对照药(顺铂)以及安息香化合物样品(设置5个浓度，分别为100，50，25，12.5，6.25 μmol·L-1)加入到96孔板中，每个浓度梯度设置3个复孔，于5%CO2，37 ℃细胞培养箱中培养24 h。最后将稀释好的CCK-8加入96孔板，继续培养2 h，用酶标仪在450 nm波长下测定其吸光度A，Graphad prism 5.0计算样品的半数抑制浓度(IC50)。
3 结构鉴定
化合物1 白色针晶(三氯甲烷)，EI-MS m/z 442.73 [M]＋。1H-NMR(500 MHz，CDCl3)δ：5.51(1H，dd，J＝8.1，3.1 Hz，H-15)，3.22(2H，d，J＝10.8 Hz，H-28)，3.19(1H，dd，J＝11.1，4.7 Hz，H-3)，2.56(1H，dd，J＝15.6，6.7 Hz，H-18)，1.06(3H，s，CH3)，0.97(3H，s，CH3)，0.97(3H，s，CH3)，0.96(3H，s，CH3)，0.92(3H，s，CH3)，0.89(3H，s，CH3)，0.80(3H，s，CH3)。13C-NMR(125 MHz，CDCl3)δ：37.7(C-1)，27.3(C-2)，79.2(C-3)，40.5(C-4)，55.6(C-5)，18.9(C-6)，35.9(C-7)，39.2(C-8)，44.9(C-9)，37.9(C-10)，15.6(C-11)，30.9(C-12)，38.1(C-13)，159.3(C-14)，115.8(C-15)，32.8(C-16)，38.9(C-17)，49.3(C-18)，41.4(C-19)，28.8(C-20)，33.7(C-21)，28.1(C-22)，17.5(C-23)，28.1(C-24)，15.6(C-25)，30.0(C-26)，26.2(C-27)，65.6(C-28)，21.8(C-29)，33.6(C-30)。以上数据与文献[11]基本一致，故鉴定为myricadiol。
化合物2 白色针晶(三氯甲烷)，EI-MS m/z 454.69 [M]＋。1H-NMR(500 MHz，DMSO)δ：12.03(1H，s，28-COOH)，5.17(1H，t，H-12)，2.74(1H，dd，J＝14.0，4.6 Hz，H-18)，2.50(1H，m，H-2)，2.27(1H，ddd，J＝15.8，7.0，3.7 Hz，H-2)，1.09(3H，s，H-27)，0.98(3H，s，H-25)，0.96(3H，s，H-30)，0.94(3H，s，H-29)，0.86(6H，s，H-23，24)，0.76(3H，s，H-26)。13C-NMR(125 MHz，DMSO)δ：38.8(C-1)，33.6(C-2)，216.0(C-3)，46.6(C-4)，54.3(C-5)，19.2(C-6)，32.1(C-7)，38.4(C-8)，46.2(C-9)，36.3(C-10)，22.6(C-11)，121.4(C-12)，143.8(C-13)，41.4(C-14)，27.2(C-15)，23.3(C-16)，45.6(C-17)，40.9(C-18)，45.5(C-19)，30.4(C-20)，33.3(C-21)，31.8(C-22)，26.3(C-23)，21.1(C-24)，14.7(C-25)，16.7(C-26)，25.5(C-27)，178.5(C-28)，32.8(C-29)，23.0(C-30)。以上数据与文献[12]基本一致，故鉴定为3-keto-oleanonic acid。
化合物3a 白色粉末(三氯甲烷)，EI-MS m/z 328.41 [M]＋。1H-NMR(500 MHz，CDCl3)δ：7.17(2H，d，J＝8.6 Hz，H-2′，6′)，7.15(2H，d，J＝8.5 Hz，H-2″，6″)，6.82(2H，d，J＝8.5 Hz，H-3′，5′)，6.75(2H，d，J＝8.6 Hz，H-3″，5″)，6.20(1H，d，J＝15.7 Hz，H-5)，5.92(1H，ddd，J＝15.7，7.9，6.7 Hz，H-4)，4.18(1H，d，J＝7.0 Hz，H-1)，3.53(1H，dd，J＝9.3，5.6 Hz，H-6b)，3.35(1H，m，H-6a)，3.34(3H，s，6-OCH3)，3.19(3H，s，1-OCH3)，2.19(1H，m，J＝13.5，6.7，4.9，1.5 Hz，H-2)，2.08(1H，m，H-3b)，1.98(1H，m，H-3a)。13C-NMR(125 MHz，CDCl3)δ：83.1(C-1)，45.6(C-2)，31.1(C-3)，126.6(C-4)，131.0(C-5)，71.7(C-6)，132.2(C-1′)，129.0(C-2′，6′)，115.5(C-3′，5′)，155.3(C-4′)，130.9(C-1″)，127.4(C-2″，6″)，115.2(C-3″，5″)，154.9(C-4″)，59.0(6-OCH3)，56.9(1-OCH3)。以上数据与文献[13]基本一致，故鉴定为(4E)-1，5-bis(4-hydroxyphenyl)-1-methoxy-2-(methoxy-methyl)-4-pentene。
化合物3b 白色粉末(三氯甲烷)，EI-MS m/z 328.41 [M]＋。1H-NMR(500 MHz，CDCl3)δ：7.21(2H，d，J＝8.6 Hz，H-2′，6′)，7.16(2H，d，J＝8.5 Hz，H-2″，6″)，6.82(2H，d，J＝8.5 Hz，H-3′，5′)，6.76(2H，d，J＝8.6 Hz，H-3″，5″)，6.32(1H，d，J＝15.7 Hz，H-5)，6.02(1H，m，H-4)，4.16(1H，d，J＝7.3 Hz，H-1)，3.24(1H，dd，J＝9.3，5.1 Hz，H-6a)，3.22(3H，s，6-OCH3)，3.20(3H，s，1-OCH3)，2.99(1H，dd，J＝9.4，5.0 Hz，H-6b)，2.01(2H，t，J＝6.2 Hz，H-2，H-3a)，1.92(1H，t，J＝10.3 Hz，H-3b)。13C-NMR(125 MHz，CDCl3)δ：83.3(C-1)，46.4(C-2)，27.3(C-3)，127.2(C-4)，130.2(C-5)，71.8(C-6)，130.8(C-1′)，127.4(C-2′，6′)，115.3(C-3′，5′)，155.1(C-4′)，129.9(C-1″)，115.5(C-3″，5″)，154.8(C-4″)，128.7(C-2″，6″)，58.9(6-OCH3)，57.1(1-OCH3)。以上数据与文献[13]基本一致，故鉴定为化合物3a的同分异构体。
化合物4 白色粉末(三氯甲烷)，EI-MS m/z 164.20 [M]＋。1H-NMR(500 MHz，DMSO)δ：9.55(1H，s，H-4′)，7.26(2H，d，J＝8.6 Hz，H-2′，H-6′)，6.72(2H，dd，J＝6.5，4.8 Hz，H-3′，H-5′)，6.48(1H，d，J＝16.0 Hz，H-1)，6.10(1H，dt，J＝15.9，6.1 Hz，H-2)，3.98(2H，dd，J＝6.1，1.2 Hz，H-3)，3.25(3H，s，3-OCH3)。13C-NMR(125 MHz，DMSO)δ： 131.7(C-1)，122.8(C-2)，72.5(C-3)，57.1(C-OCH3)，127.4(C-1′)，127.7(C-2′，6′)，115.4(C-3′)，157.2(C-4′)。以上数据与文献[13]基本一致，故鉴定为(E)-p-coumaryl alcohol γ-Ο-methyl ether。
化合物5 白色粉末(三氯甲烷)，EI-MS m/z 354.36 [M]＋。1H-NMR(500 MHz，CDCl3)δ：6.82(2H，d，J＝1.6 Hz，H-6，H-6′)，6.77(2H，dd，J＝1.6，0.5 Hz，H-2，H-2′)，6.76(2H，d，J＝0.5 Hz，H-5，H-5′)，5.93(4H，s，O-CH2-O)，4.69(2H，d，J＝4.3 Hz，H-7，H-7′)，4.22(2H，m，Ha-9，H-9′)，3.85(2H，dd，J＝9.3，3.7 Hz，Hb-9，H-9′)，3.03(2H，ddd，J＝4.7，3.1，1.4 Hz，H-8，H-8′)。13C-NMR(125 MHz，CDCl3)δ：148.1(C-4，4′)，147.3(C-3，3′)，135.2(C-1，1′)，119.5(C-6，6′)，108.3(C-5，5′)，106.6(C-2，2′)，101.2(O-CH2-O)，85.9(C-7，7′)，71.9(C-9，9′)，54.5(C-8，8′)。以上数据与文献[14]基本一致，故鉴定为芝麻素。
化合物6 黄色油状物(三氯甲烷)，EI-MS m/z 430.46 [M]＋。1H-NMR(500 MHz，CDCl3)δ：8.04(1H，m，H-2b，6b)，7.56(1H，m，H-4d)，7.45(2H，m，H-3c，5c)，7.40(1H，dd，J＝8.1，1.7 Hz，H-6′)，7.32(1H，d，J＝1.7 Hz，H-2′)，6.99(1H，d，J＝1.4 Hz，H-4)，6.87(1H，d，J＝8.1 Hz，H-5′)，6.79(1H，s，H-3)，6.63(1H，d，J＝1.3 Hz，H-6)，6.01(2H，s，OCH2O)，4.38(2H，t，J＝6.4 Hz，H-3″)，4.02(3H，s，7-OCH3)，2.87(2H，m，H-1″)，2.18(2H，m，H-2″)。13C-NMR(125 MHz，CDCl3)δ：156.3(C-2)，100.5(C-3)，112.6(C-4)，137.1(C-5)，107.6(C-6)，145.0(C-7)，142.6(C-8)，131.3(C-9)，124.9(C-1′)，105.7(C-2′)，148.2(C-3′，4′)，108.8(C-5′)，119.4(C-6′)，101.5(O-CH2-O)，32.9(C-1″)，30.9(C-2″)，64.5(C-3″)，56.4(7-OCH3)，130.5(C-1a)，129.7(C-2b，6b)，128.5(C-3c，5c)，133.0(C-4d)，166.8(C＝O)。以上数据与文献[15]基本一致，故鉴定为5-(3″-benzoyloxypropyl)-7-methoxy-2-(3′，4′-methylenedioxy phenyl)-benzofuran。
化合物7 白色粉末(三氯甲烷)，EI-MS m/z 278.35 [M]＋。1H-NMR(500 MHz，CDCl3)δ：7.71(2H，dd，J＝5.7，3.3 Hz，H-3，6)，7.52(2H，dd，J＝5.7，3.3 Hz，H-4，5)，4.30(4H，t，J＝6.7 Hz，H-1′)，1.71(2H，dq，J＝8.9，6.8 Hz，H-2′)，1.45(4H，m，H-3′)，0.96(6H，t，J＝7.4 Hz，H-4′)。13C-NMR(125 MHz，CDCl3)δ：167.9(COO)，132.4(C-1，2)，131.1(C-4，5)，128.0(C-3，6)，65.7(C-1′)，30.7(C-2′)，19.3(C-3′)，13.8(C-4′)。以上数据与文献[16]基本一致，故鉴定为邻苯二甲酸二丁酯。
化合物8 棕色粉末(三氯甲烷)，EI-MS m/z 182.18 [M]＋。1H-NMR(500 MHz，CDCl3)δ：7.63(1H，dd，J＝8.3，1.9 Hz，H-6)，7.54(1H，d，J＝1.9 Hz，H-2)，6.93(1H，d，J＝8.3 Hz，H-5)，3.94(3H，s，3-OCH3)，3.85(3H，s，H-8)。13C-NMR(125 MHz，CDCl3)δ：122.4(C-1)，111.9(C-2)，150.1(C-3)，146.3(C-4)，114.2(C-5)，124.3(C-6)，167.0(C-7)，52.1(C-8)，56.2(3-OCH3)。以上数据与文献[17]基本一致，故鉴定为香草酸甲酯。
化合物9 无色针状结晶(三氯甲烷)，EI-MS m/z 122.12 [M]＋。1H-NMR(500 MHz，CD3OD)δ：9.76(1H，s，H-7)，7.78(2H，m，H-2，6)，6.92(2H，d，J＝8.6 Hz，H-3，5)。13C-NMR(125 MHz，CD3OD)δ：192.9(7-CHO)，165.1(C-4)，133.4(C-2，6)，130.2(C-1)，116.9(C-3，5)。以上数据与文献[18]基本一致，故鉴定为对羟基苯甲醛。
化合物10 无色块状结晶(三氯甲烷)，EI-MS m/z 136.15 [M]＋。1H-NMR(500 MHz，CD3OD)δ：7.88(2H，d，J＝8.8 Hz，H-3，5)，6.83(2H，d，J＝8.8 Hz，H-2，6)，2.52(3H，s，H-8)。13C-NMR(125 MHz，CD3OD)δ：164.4(C-1)，116.4(C-2，6)，132.2(C-3，5)，129.9(C-4)，199.6(C-7)，26.3(C-8)。以上数据与文献[18]基本一致，故鉴定为对羟基苯乙酮。
化合物11 无色块状结晶(三氯甲烷)，EI-MS m/z 166.18 [M]＋。1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：7.56(1H，dd，J＝8.3，2.0 Hz，H-6)，7.51(1H，d，J＝2.0 Hz，H-2)，6.85(1H，d，J＝8.3 Hz，H-5)，3.89(3H，s，3-OCH3)，2.53(3H，s，CH3-7)。13C-NMR(125 MHz，CD3OD)δ：130.5(C-1)，111.8(C-2)，149.0(C-3)，153.4(C-4)，115.8(C-5)，125.2(C-6)，199.5(C-7)，26.2(C-8)，56.4(3-OCH3)。以上数据与文献[19]基本一致，故鉴定为香草乙酮。
化合物12 白色粉末(三氯甲烷)，EI-MS m/z 450.31[M]＋。1H-NMR(500 MHz，CDCl3)δ：6.17(1H，dd，J＝10.1，3.0 Hz，H-12)，5.74(1H，dd，J＝10.2，2.1 Hz，H-11)，4.71(1H，s，H-19)，1.10(3H，s，H-29)，1.10(3H，s，H-23)，1.07(3H，s，H-25)，1.04(3H，s，H-24)，1.03(3H，s，H-27)，0.94(3H，d，J＝3.7 Hz，H-30)，0.80(3H，s，H-26)。13C-NMR(125 MHz，CD3OD)δ：39.2(C-1)，34.0(C-2)，217.2(C-3)，47.6(C-4)，54.7(C-5)，19.5(C-6)，32.6(C-7)，41.0(C-8)，52.3(C-9)，36.6(C-10)，129.1(C-11)，123.5(C-12)，134.7(C-13)，40.7(C-14)，25.7(C-15)，24.4(C-16)，44.2(C-17)，133.3(C-18)，85.1(C-19)，35.9(C-20)，32.7(C-21)，34.7(C-22)，26.5(C-23)，21.1(C-24)，17.6(C-25)，17.0(C-26)，19.3(C-27)，178.1(C-28)，28.0(C-29)，23.4(C-30)。以上数据与文献[20]基本一致，故鉴定为3-oxo-olean-11，13(18)-dien-28，19β-olide。
化合物13 白色无定型粉末(三氯甲烷)，EI-MS m/z 152[M]＋。1H-NMR(500 MHz，DMSO)δ：9.91(1H，s，7-CHO)，7.57(1H，dd，J＝8.1，1.8 Hz，H-5)，7.53(1H，d，J＝1.7 Hz，H-2)，7.11(1H，d，J＝8.0 Hz，H-6)，6.19(1H，s，4-OH)，3.99(3H，s，3-OCH3)。13C-NMR(125 MHz，DMSO)δ：190.9(7-CHO)，126.3(C-1)，110.6(C-2)，148.3(C-3)，153.8(C-4)，115.5(C-5)，128.3(C-6)，55.6(3-OCH3)。以上数据与文献[11]基本一致，故鉴定为香草醛。
化合物14 白色针状晶体(三氯甲烷)，EI-MS m/z 122[M]＋。1H-NMR(500 MHz，CDCl3)δ：11.38(1H，s，COOH)，8.14(2H，d，J＝7.2 Hz，H-3，7)，7.63(1H，t，J＝7.4 Hz，H-5)，7.49(2H，t，J＝7.7 Hz，H-4，6)。13C-NMR(125 MHz，CDCl3)δ：172.6(C-1)，129.5(C-2)，130.4(C-3，7)，128.6(C-4，6)，134.0(C-5)。以上数据与文献[21]基本一致，故鉴定为苯甲酸。
化合物15 白色粉末(三氯甲烷)，EI-MS m/z 472 [M]＋。1H-NMR(500 MHz，C5D5N)δ：5.67(1H，br s，H-12)，3.73(2H，br s，H-18，19)，3.53(1H，dd，J＝11.0，5.0 Hz，H-3)，1.66(3H，s，H-27)，1.25(3H，s，H-29)，1.20(3H，s，H-23)，1.13(3H，s，H-30)，1.08(3H，s，H-26)，1.04(3H，s，H-24)，0.94(3H，s，H-25)。13C-NMR(125 MHz，C5D5N)δ：38.8(C-1)，28.4(C-2)，78.2(C-3)，39.4(C-4)，56.0(C-5)，19.0(C-6)，33.7(C-7)，40.0(C-8)，48.4(C-9)，37.6(C-10)，24.2(C-11)，123.8(C-12)，144.9(C-13)，42.2(C-14)，29.2(C-15)，28.1(C-16)，46.1(C-17)，44.8(C-18)，81.3(C-19)，35.8(C-20)，28.9(C-21)，33.4(C-22)，29.2(C-23)，16.5(C-24)，15.5(C-25)，17.5(C-26)，24.9(C-27)，180.9(C-28)，28.8(C-29)，24.9(C-30)。以上数据与文献[22]基本一致，故鉴定为逞罗树脂酸。
4 抗肿瘤活性考察
采用CCK-8方法测定了化合物1～15和顺铂对肿瘤细胞存活率的影响，结果见表1。与顺铂相比，化合物2，3a，3b，6，7，8，11，12，15均有不同程度的抑制作用。其中化合物2，12对5种肿瘤细胞均有较强的抑制作用；化合物7对MCF-7，化合物8对HeLa，化合物15对HeLa也都有很强的抑制作用，且都优于顺铂。
| 化合物 | HepG2 | A549 | HeLa | MCF-7 | PC-3 |
|---|---|---|---|---|---|
| 1 | >100 | >100 | >100 | >100 | >100 |
| 2 | 20.58±1.49 | 24.77±0.46 | 12.16±0.70 | 18.95±0.62 | 25.55±1.48 |
| 3a | 93.84±1.95 | 74.54±3.87 | 77.06±4.44 | 67.64±6.20 | >100 |
| 3b | >100 | >100 | 90.31±7.01 | >100 | >100 |
| 4 | >100 | >100 | >100 | >100 | >100 |
| 5 | >100 | >100 | >100 | >100 | >100 |
| 6 | >100 | >100 | >100 | 57.1±2.15 | >100 |
| 7 | 53.84±4.07 | 51.23±0.24 | >100 | 31.97±1.68 | 54.42±4.26 |
| 8 | >100 | 67.98±2.66 | 27.28±1.54 | >100 | >100 |
| 9 | >100 | >100 | >100 | >100 | >100 |
| 10 | >100 | >100 | >100 | >100 | >100 |
| 11 | >100 | >100 | 51.51±4.24 | >100 | >100 |
| 12 | 18.91±1.03 | 14.67±0.80 | 10.76±0.74 | 18.82±1.80 | 9.80±1.45 |
| 13 | >100 | >100 | >100 | >100 | >100 |
| 14 | >100 | >100 | >100 | >100 | >100 |
| 15 | 86.00±6.68 | >100 | 39.93±3.80 | 53.74±4.08 | >100 |
| 顺铂 | 36.62±1.25 | 38.57±3.77 | 40.95±0.82 | 47.36±3.17 | 35.89±2.49 |
5 讨论
安息香在我国分布广泛，是非常值得进一步开发和实现综合利用的农林副产品。为了实现安息香合理开发和综合利用，其化学成分和药理活性研究是基础。本文从安息香树脂中分离出的15个单体化合物并采用HepG2，A549，HeLa，MCF-7，PC-3肿瘤细胞对其进行抗肿瘤活性筛选，发现了化合物2和12对这5种肿瘤细胞均有良好的抗肿瘤活性，且都显著优于阳性药。除了化合物7，8和15在抑制MCF-7，HeLa细胞活性方面有一定活性，其他化合物均没有很明显的抗肿瘤活性。笔者推测萜类化合物可能是安息香发挥抗肿瘤的重要物质基础，显示了其在作为天然抗肿瘤药物开发上的良好发展潜力。
